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背景和目的既往研究认为炎症反应在脑出血病理生理过程中具有神经毒性作用,近期研究发现炎症反应可能在脑出血病理生理过程中具有双向作用,且该双向作用可能与炎症细胞存在不同类型或同一细胞存在不同亚型有关。目前虽有研究在动物实验中发现脑出血急性期外周血与血肿液中免疫细胞的成分发生了显著的改变,且有些细胞成分的比例或计数与脑出血的预后相关,但尚缺乏脑出血急性期外周血与血肿液中细胞免疫成分分析的系统临床研究。为评价急性脑出血患者外周血与血肿液中细胞免疫成分的改变及其与临床预后之间的关系,本研究检测了脑出血急性期外周血与血肿液中细胞免疫成分的改变,并评价了其与脑出血患者90天预后之间的关系,希望通过本项目的研究筛选出可能与脑出血预后相关的治疗靶点。方法选取2016年1月1日～2017年10月31日在郑州大学第五附属医院与巩义市人民医院神经外科住院且接受颅脑微创血肿清除术(MIS)的急性脑出血患者35例为脑出血组,同期来我院健康体检者55例作为对照组。分别收集脑出血患者微创手术前的外周血样本10ml、手术过程中引流的血肿液7-10ml和签署知情同意书当天对照组的外周血样本10m L。通过流式细胞术检测外周血及血肿液中淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、辅助T细胞(helper T cells,Th)、细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)、B淋巴细胞、自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)、Th17细胞、调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)、T细胞受体(TCR)αβT细胞、T细胞受体(TCR)γδT细胞、树突状细胞(dendritic cells,DC)、M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、M1小胶质细胞、M2小胶质细胞的比例。记录脑出血患者入院时美国国立卫生研究院卒中量表评分(NIHSS评分)、格拉斯哥昏迷评分(GCS评分)、发病到手术时间、病灶体积等临床资料,电话随访并记录发病第90天的神经功能评分(m RS)等。分析急性脑出血患者外周血和血肿液中免疫细胞的变化,并评价各免疫细胞比例与患者入院时脑损伤程度及90天预后之间的关系。结果1.急性脑出血患者外周血和血肿液中免疫细胞计数及比例的变化与对照组相比,脑出血组患者外周血中白细胞、单核细胞、粒细胞的绝对计数及粒细胞、Treg细胞、Th17细胞比例升高,淋巴细胞的绝对计数及淋巴细胞、M1和M2巨噬细胞比例降低,差异具有统计学意义(均p<0.05)。与急性脑出血患者外周血相比,血肿液中淋巴细胞、细胞毒性T细胞、树突状细胞、M1和M2巨噬细胞比例明显升高,粒细胞、Th细胞、B淋巴细胞比例明显降低,差异具有统计学意义(均p<0.05)。2.急性脑出血患者不同分组外周血和血肿液中免疫细胞的比较单因素分析表明,与男性患者相比,女性患者血肿液中TCRαβT细胞比例低(p=0.028),M1巨噬细胞比例高(p=0.038)。与≤60岁患者相比,>60岁患者外周血中Treg细胞比例低,血肿液中Th17细胞、M1巨噬细胞、M1小胶质细胞比例高。GCS≤7分的患者外周血中Treg细胞的比例低于GCS>7的患者。脑出血12-30小时的患者外周血Th细胞比例明显低于脑出血12小时内患者。病灶体积>50 m L的患者外周血中白细胞、单核细胞、粒细胞的绝对计数及血肿液中细胞毒性T细胞的比例均高于病灶体积≤50 m L的患者,差异均有统计学意义(p<0.05)。3.急性脑出血患者入院时脑损伤程度与外周血和血肿液中免疫细胞比例的相关性分析病灶体积与血肿液中细胞毒性T淋巴细胞比例呈正相关(r=0.36,p=0.033),与M2小胶质细胞比例呈负相关(r=-0.40,p=0.018)。GCS评分与发病至手术的时间呈正相关(r=0.458,p=0.006)、与入院时NIHSS评分呈负相关(r=-0.352,p=0.038),调整发病至手术的时间及NHISS评分的影响后,GCS评分与血肿液中TCRγδT细胞的比例呈负相关(r=-0.352,p=0.038)。NIHSS评分与患者年龄呈正相关(r=0.484,P=0.003),与入院时GCS评分呈负相关(r=-0.352,p=0.038),调整年龄及GCS评分影响后,脑出血患者的NIHSS评分与外周血M1巨噬细胞比例仅边缘相关(r=0.34,p=0.056)。4.外周血和血肿液中免疫细胞的比例与急性脑出血患者90天预后之间的关系单因素分析表明,预后良好组(m RS≤3)患者年龄明显小于预后不良组(m RS>3)患者(56.40岁vs 67.65岁;p=0.014),预后良好组的患者NIHSS评分明显低于预后不良组的患者(19 vs 24;p=0.013),差异具有统计学意义。单因素分析表明,与预后不良组相比,预后良好组患者外周血单核细胞和Treg细胞比例显著升高,而粒细胞比例显著降低,此外,预后良好组患者血肿液中M1巨噬细胞和M1小胶质细胞的比例明显低于预后不良组,差异具有统计学意义(均p<0.05)。二元logistic回归分析表明,剔除年龄、NHISS评分、收缩压的影响后,血肿液中M1巨噬细胞比例的增加(OR=5.23,p=0.044)与脑出血患者90天的不良预后相关。结论1.脑出血对外周免疫系统具有显著影响,血肿液中的免疫细胞成分可能来源于破裂血管外渗或通过血脑屏障迁移渗透至血肿周围的外周免疫细胞。2.外周血或血肿液中的免疫细胞成分对脑出血预后可能具有预测价值,如血肿液中M1巨噬细胞比例的升高与不良预后相关。