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宫颈癌(cervical cancer,CC)作为全世界妇科最常见的恶性肿瘤,在所有女性肿瘤中死亡率和发病率均较高。但自1950s,女性群体开始进行宫颈细胞学检查以来,已使宫颈癌在人群中的发生率和死亡率得到显著下降。目前宫颈细胞学结果报告系统采纳TBS分类法,而后针对不同的报告结果行进一步的诊疗措施。但直到目前为止,报告结果中的未明确意义的不典型鳞状上皮细胞(atypical squamous cells of undetermined significance,ASCUS)患者的诊疗方案仍存在争议。目前得到专家学者们一致认可的方案有以下三种:1.6-12月后再次行细胞学检查;2.进一步行阴道镜下检查,必要时行组织活检;3.行高危型人乳头瘤病毒(high risk-human papillomavirus,HR-HPV)DNA检测进行分流;其中进一步行HR-HPV DNA检测分流,性价比较高,它不仅可减少阴道镜检查的转诊率,还可使漏诊高级别宫颈病变的机会得到降低。但随着研究的深入,学者们发现HR-HPV DNA检测分流ASCUS患者存在着低特异性和低阳性预测值的问题,同样存在不必要的阴道镜检查。因而探索出一种可以准确对ASCUS患者进行分流的检测指标,对ASCUS患者进行个体化的管理是十分必要且有意义的。多项研究均证明HR-HPV E6/E7基因的表达是宫颈组织HPV持续性感染和癌变所必经的一步。在宫颈上皮细胞癌变过程中,HPV将其E6/E7 DNA整合入宫颈上皮细胞基因组中,使得宫颈上皮细胞获得癌基因E6/E7,其在外界致癌因素刺激下被激活转录产生E6/E7 mRNA,进而生成癌蛋白E6/E7,分别与抑癌蛋白P53和成视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein,PRb)结合后,造成后者蛋白失活,最终引起宫颈癌变。因此,HR-HPV E6/E7 mRNA检测阳性不仅代表了HPV的持续感染,还在某种程度上反应了E6/E7癌蛋白的表达和宫颈病变的活跃程度,通过检测ASCUS患者宫颈脱落细胞标本中的E6/E7 mRNA,可望使ASCUS患者的进一步诊疗问题得到解决。目的本研究通过对ASCUS患者的年龄、孕次、产次、初次生育年龄、HR-HPV DNA定性结果、HR-HPV DNA分类载量、HR-HPV E6/E7 mRNA定性结果、HR-HPV E6/E7 mRNA分类载量进行分析,探讨影响ASCUS患者病理活检结果为高级别宫颈上皮内瘤变和宫颈癌,包括宫颈上皮内病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅱ级及以上病变,简称CINⅡ+的危险因素,并评价HR-HPV E6/E7 mRNA检测在ASCUS患者分层管理中的价值,为指导临床处理提供客观依据。方法1.收集2015年12月至2017年7月期间,于郑州大学第三附属医院妇科门诊进行宫颈脱落细胞学检测,诊断结果为ASCUS,且已行阴道镜检查及活检的有效剩余标本液,从此人群中筛选出采用杂交捕获Ⅱ(HC-Ⅱ)方法行HR-HPV DNA检测的患者160例。详细记录所有患者的年龄、孕产次、初次生育年龄、HR-HPV DNA检测结果以及宫颈活检病理结果。2.处理残余的宫颈脱落细胞学检测标本液,采用支链DNA技术检测残余有效标本中HR-HPV E6/E7 mRNA的表达。统计学分析使用SPSS 21.0软件来进行统计数据分析。ASCUS患者临床资料与活检病理结果为CINⅡ+之间的关系采用单因素和多因素分析。不同宫颈病变级别间HR-HPV E6/E7 mRNA表达水平的差异采用Mann-Whitney U检验;采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析HR-HPV E6/E7mRNA检测对CINⅡ+的检测效能。检验水准取双侧α=0.05。结果1.160例ASCUS患者活检病理结果为炎症者69例(43.125%),CINⅠ60例(37.50%),CINⅡ22例(13.75%),CINⅢ8例(5.00%),宫颈浸润癌1例(0.625%),其中宫颈组织活检病理结果为CINⅡ+的例数为31例(19.38%)。2.分析ASCUS患者临床资料与病理结果为CINⅡ+的关系,其中单因素分析显示,年龄、孕次、产次、初次生育年龄、HR-HPV DNA载量与ASCUS患者病理检测结果为CINⅡ+无明显相关性(P>0.05),而HR-HPV DNA阳性、HR-HPV E6/E7 mRNA阳性、HR-HPV E6/E7 mRNA高载量与ASCUS病理结果为CINⅡ+明显相关(P<0.05)。多因素分析显示,仅HR-HPV E6/E7mRNA高载量是影响ASCUS活检病理结果为CINⅡ+的危险因素(OR=8.971,95%CI=2.572-31.289,P=0.001)。3.CINⅡ+中HR-HPV E6/E7 mRNA中位载量值为11775.97 copies/ml;宫颈炎症以及CINⅠ中HR-HPV E6/E7 mRNA中位载量值为537.07 copies/ml,两者间具有统计学差异(P<0.05)。4.HR-HPV E6/E7 mRNA分类载量分析、HR-HPV E6/E7 mRNA定性分析、HR-HPV DNA定性分析诊断CINⅡ+的敏感性分别为90.32%,88.46%,100%,特异性分别为49.61%,40.30%,15.05%。采用ROC曲线分析HR-HPV E6/E7mRNA载量分析诊断ASCUS患者中CINⅡ+的最佳临界点为558.26copies/ml,此时敏感性为90.32%,特异性为51.16%,进一步比较HR-HPVE6/E7 mRNA载量分析以及上述三种检测方法的曲线下面积,其中HR-HPV E6/E7 mRNA载量分析的曲线下面积最大为0.749(95%CI=0.658-0.840)。结论1.ASCUS患者的病理结果具有多样性,分布在炎症、CIN各级别病变以及宫颈浸润癌中。2.HR-HPV E6/E7 mRNA高载量是影响ASCUS患者宫颈活检病理结果为CINⅡ+的独立危险因素。3.HR-HPV E6/E7 mRNA载量分析可准确诊断出ASCUS患者中的CINⅡ+病变,有望代替HPV DNA检测成为分流ASCUS的有效手段。