在不断的进化过程中,真核生物为保证遗传信息的精确传递,机体内出现了许多mRNA质量监控机制。其中,无义介导的mRNA降解(nonsense-mediatedmRNA decay,NMD)是一种广泛存在的转录后调控机制。NMD不仅能够降解细胞内含提前终止密码子(premature termination codons,PTC)的异常mRNA,还能够调节哺乳动物细胞在不同生理条件下转录组和蛋白组的动态平衡。选择性剪接发生在前体mRNA的修饰过程中,使得一种基因可产生多种mRNA序列,即不同的剪接异构体。但并不是所有的剪接产物都能够翻译成正常蛋白质而发挥其功能,一定比例的剪接产物会携带PTC,在翻译过程中触发NMD途径发生降解。SMG9(nonsense mediated mRNA decay factor)是NMD通路中的重要因子,能够与SMG1形成复合体调控UPF1的磷酸化。我们在研究过程中发现,SMG9发生了选择性剪接且产生了一种新的异构体。我们对SMG9的新剪接异构体进行了鉴定,并对其在细胞内的表达及调控进行了分析。SMG9参与NMD通路,调控底物基因的表达,同时SMG9的自身表达也受到NMD通路的调控。这一发现,能够使我们更加深入的了解NMD过程及此过程中存在的反馈调节模式,为解析NMD分子机制提供理论依据。取得的主要研究结果如下:(1)发现并鉴定了 剪接异构体。其CDS区全长927bp,可编码308个氨基酸。我们将已经报道的SMG9记为SMG9a,本研究中新发现的剪接异构体记为SMG9b。(2)通过Q-PCR、WB等试验验证了 SMG9b的相对表达量,且SMG9bb在mRNA水平上表达量高于SMG9aa;而蛋白水平上,SMG9b的表达量低于SMG9a。(3)通过超表达、干扰试验发现SMG9a与SMG9b之间可能存在相互作用,即SMG9a表达量上升时,SMG9b也上升;SMG9a下降时,SMG9b同时下降,反之亦然。(4)生物信息学软件预测了作用于SMG9 CDS区的miR-4651,Q-PCR试验结果表明,miR-4651可抑制SMG9的表达。(5)超表达SMG9b导致NMD底物基因的表达下降,表明SMG9b参与NMD通路。特异干扰SMG9a、超表达SMG9b导致NMD底物基因下降,表明SMG9b可能是直接参与NMD通路。干扰UPF1导致SMG9b的表达量下降,表明SMG9b是NMD的底物,受NMD的反馈调节。以上结果表明,剪接异构体SMG9b虽与SMG9a在NMD中发挥相似功能,但其表达调控模式似乎更加复杂。SMG9b作为NMD的因子发挥作用的同时,其本身也是NMD的作用底物之一,这一发现使得NMD中的负反馈调节这一机制变得更加引人注目。