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大量研究结果已表明，糖链结构的改变与癌变、感染等疾病的发生、发展紧密相关，数量众多的糖链如同天线一样，在生物体内参与细胞间的识别和分子信息的传递，因此糖链结构的研究是十分重要的。而糖链的合成离不开糖基转移酶的作用，研究发现糖基转移酶的异常表达与肿瘤相关。从而提示我们针对糖基转移酶的研究十分必要。在实验室前期研究中，通过比较癌症与癌旁组织，发现癌组织N-糖链中三天线糖链含量显著性升高。在此基础上，本实验利用高效液相色谱法分离肝癌细胞上N-糖链中特异性目的糖峰，并利用外切糖苷酶酶切的方法解析出的四种特异性糖峰的结构，分别为NA2、NA2FB、NA3FB以及高甘露糖型聚糖结构。此外，针对与三天线糖链合成相关的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶IVa（GnT-IVa）进行了深入研究，在前期工作中发现GnT-IVa在癌症组中含量显著性升高，从而推测GnT-IVa与癌症发生相关。因此，本实验中主要采用RNAi的方法，研究GnT-IVa基因表达沉默后，肝癌细胞相关生物学行为的改变。利用RT-PCR和westernblot分别从RNA以及蛋白质水平上检测RNAi后肝癌细胞BEL-7402中GnT-IVa的表达下调情况。同GnT-IVa/N.C.组相比较，BEL-7402GnT-IVa/1668中的GnT-IVa在RNA以及蛋白质水平上的表达匀受到抑制，抑制率为60%以上。在此基础上，对与GnT-IVa相关的三天线糖含量变化进行了探讨，针对RNAi后的肝癌细胞提取细胞膜蛋白进行糖链分析，结果发现GnT-IVa表达下调后，相应的肝癌细胞中三天线糖含量也有所下调。同时MTT实验结果表明， GnT-IVa经RNAi后，HepG2和BEL-7402细胞的增殖能力均有所下调。同样在划痕实验中，发现转染GnT-IVa/1668实验组较GnT-IVa/N.C.组相比，在BEL-7402、HepG2细胞中，愈合率均有下调，说明GnT-IVa表达下调，会使得肝癌细胞的运动能力变弱。利用侵袭小室研究RNAi后肝癌细胞迁移侵袭能力的改变，与GnT-IVa/N.C.组相比，RNAi后的实验组穿过基质胶的细胞个数明显减少，说明GnT-IVa表达下调，会使得肝癌细胞的迁移侵袭能力变弱。本课题利用外切糖苷酶酶切的方法初步解析出HepG2细胞膜蛋白中4个特异性N-糖链结构，并且发现GnT-IVa表达下调后肝癌细胞中三天线糖链含量、细胞增殖能力、运动能力、迁移侵袭能力均有所下降。为糖链结构的初步解析以及GnT-IVa的功能研究奠定了基础。