研究目的及背景:尤文肉瘤是一种高度侵袭性的恶性肿瘤,在青少年中发病率较高,由于其转移早,易复发,预后较差,严重危害青少年健康。多项研究表明,FTO(Fat Mass and Obesity Associated)基因与m6A甲基化修饰密切相关,在乳腺癌、胃癌、急性髓性白血病(AML)等多种肿瘤中均有过表达,并且参与了多种肿瘤的发生、发展、侵袭和转移,是未来靶向治疗研究的重要热点。而FTO在尤文肉瘤中的表达及其与尤文肉瘤恶性生物学行为的关系尚未见文献报道。磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)作为一种典型的肿瘤抑制因子在尤文肉瘤中的作用亦鲜有报道。本研究通过探究FTO基因在尤文肉瘤中的表达情况,对尤文肉瘤细胞生物学功能的影响和潜在作用机制,及PI3K/AKT信号通路中抑癌基因PTEN是否参与调控FTO对尤文肉瘤生物学行为的影响,为尤文肉瘤的治疗寻找合适的靶点提供实验依据。研究方法:通过Realtime-qPCR检测尤文肉瘤肿瘤组织及瘤旁组织、尤文肉瘤细胞系和成骨细胞中FTO及PTEN的表达差异情况。构建稳转FTO过表达与敲减尤文肉瘤细胞系,并经Realtime-qPCR与Western印迹法验证细胞系构建的稳定性。采用CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验分别检测过表达或者敲低FTO后,尤文肉瘤细胞系增殖、迁移及侵袭能力的变化。经Realtime-qPCR与Western印迹法检测FTO过表达与敲减尤文肉瘤细胞系中PTEN的表达情况。采用m6A特异性抗体的免疫共沉淀实验检测FTO过表达与敲减尤文肉瘤细胞系中PTEN的mRNA甲基化修饰水平,并通过转录抑制实验检测PTEN的mRNA的稳定性变化。PTEN回复后采用CCK-8实验检测其对FTO过表达尤文肉瘤细胞系增殖能力的影响结果:尤文肉瘤肿瘤组织及尤文肉瘤细胞系中FTO的表达量显著高于瘤旁对照组织及成骨细胞中的表达,而PTEN则相反,二者呈负相关。FTO过表达的尤文肉瘤细胞在72小时增殖能力、相对迁移距离以及侵袭细胞数均较尤文肉瘤细胞系即对照组显著提高,而FTO过表达尤文肉瘤细胞中PTEN的mRNA及蛋白表达水平,mRNA甲基化修饰水平、mRNA稳定性均有所下降。FTO敲减的尤文肉瘤细胞在72小时增殖能力、相对迁移距离以及侵袭细胞数均较尤文肉瘤细胞系即对照组显著降低,PTEN的mRNA及蛋白表达水平、mRNA甲基化修饰水平、mRNA稳定性均有所提高。PTEN回复后FTO对尤文肉瘤细胞的增殖促进作用被逆转,差异均有统计学意义。结论:FTO在尤文肉瘤中表达上调与尤文肉瘤的发生、发展有关。上调FTO表达可以促进尤文肉瘤细胞的增殖,迁移和侵袭,而下调FTO表达则取得相反的结果。该基因可能通过影响PTEN的mRNA甲基化修饰对尤文肉瘤的增殖起到促进作用。