生长因子和C型钠肽对山羊卵母细胞成熟及早期胚胎发育的影响

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哺乳动物的体外受精、孤雌生殖以及体细胞克隆技术的效率,依赖于供体卵母细胞质量。已有研究证明胰岛素样生长因子(Insulin-like growth factors,IGF1)、白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)均可促进卵母细胞的成熟,且同时添加这三种生长因子,用获得的卵母细胞进行体外受精后,可明显提高早期胚胎囊胚率及囊胚质量。但这三种生长因子对山羊卵母细胞体外成熟过程中的作用,以及它们是否有利于提高体外成熟(In vitro maturation,IVM)卵母细胞质量和支持后续早期胚胎发育的能力尚有待研究。也有大量研究表明,C型钠肽(C-type Natriuretic Peptides,CNP)是一种卵泡液中天然存在的旁分泌因子,在山羊、牛等哺乳动物卵母细胞减数分裂恢复的抑制中起重要作用。本研究主要探讨IGF1、LIF和b FGF这三种生长因子和CNP对山羊卵母细胞体外成熟及成熟后体外受精胚胎发育的影响,并期望构建一种高效的卵母细胞体外成熟培养体系、为改善山羊卵母细胞质量、提高体外胚胎生产效率提供技术依据。具体实验结果如下:1.统计结果显示,生长因子最适添加量分别为b FGF 40 ng/m L,LIF 20 ng/m L,IGF 20 ng/m L;FLI组,CNP-OMM组和CNP-FLI组均能提高体外培养山羊卵母细胞的成熟率。2.体外受精囊胚发育状况统计结果显示,不同卵母细胞体外成熟处理组均能提高早期胚胎发育能力,且FLI组成熟率显著高于CNP-OMM组和CNP-FLI组。3.囊胚细胞数及细胞分布状况统计结果显示,FLI组囊胚细胞数和内细胞团比率都显著高于其他两个处理组,认为早期胚胎质量高于CNP-OMM组、CNPFLI组。4.卵母细胞内母源基因缺失,会影响早期胚胎发育甚至造成胚胎发育阻滞。本研究的母源基因检测结果显示,添加生长因子能够提升成熟卵母细胞中DNMT1,ZAR1和NLRP5的表达量。5.卵丘细胞扩展相关基因与卵母细胞成熟质量及发育潜力密切相关。本研究的卵丘扩展基因检测结果显示,生长因子能够提升卵丘细胞中PTX3,TNFαIP6,PTGS2和HAS2的表达量。综上所述,本实验建立了一种高效山羊卵母细胞体外成熟培养体系,能够显著提高体外培养山羊卵母细胞质量和早期胚胎发育潜力。关于FLI培养体系对卵母细胞成熟的分子调控机制,我们将在接下来的研究中做进一步探究。
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