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目的:克隆中国人的TFPI-2基因(全长cDNA),并将之亚克隆至哺乳动物表达载体并在细胞中表达,以此获得首个中国人TFPI-2的cDNA克隆;通过转染肝癌细胞株HepG2,研究TFPI-2的表达对其侵袭和转移能力的影响,探讨TFPI-2在肝癌这一类具高度侵袭、转移性肿瘤中的作用;为寻找新的抗肿瘤侵袭、转移的治疗方法提供思路。方法:第一阶段:提取人肝脏总RNA,经RT-PCR扩增出TFPI-2的全长cDNA;PCR产物插入载体PCR2.1中,选择转化克隆进行酶切鉴定,DNA测序并和GeneBank中报道的TFPI-2序列比较,肯定克隆结果。用内切酶切下TFPI-2的cDNA,亚克隆至高效的哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1中。第二阶段:酶切鉴定后,用脂质体Lipofectamine2000把TFPI-2-pcDNA3.1转染入HepG2细胞中进行瞬间高效表达,Western blot检测其表达效果。同时使用G418筛选稳定表达的细胞系。第三阶段:以TFPI-2 cDNA为探针,检测TFPI-2基因在正常人肝组织、硬化肝、肝癌组织中表达的差异。用肿癌细胞趋化性试验来检测转染前后HepG2细胞趋化性变化;用肿瘤侵袭试验观察转染前后HepG2细胞的侵袭力改变。结果:本研究克隆的中国人TFPI-2基因cDNA全长1222bp,除258、585和884 bp处与目前Genbank中收录的国外学者克隆的TFPI-2基因序列不同外,其他完全一致。序列Genbank登记号:TFPI AY691946。TFPI-2成功插入pcDNA3.1表达载体,酶切鉴定其长度和方向均正确,测序结果也证实其正确的载入。将重组的TFPI-2-pcDNA3.1转染入HepG2细胞,转染成功的HepG2细胞经证实有TFPI-2 mRNA和相应蛋白的表达;而未转染的HepG2细胞没有观察到TFPI-2的表达。转染TFPI-2的肝癌细胞HepG2其迁徙能力无明显变化(穿膜细胞数为115.3±6.0 vs 121.7±7.1, P>0.05),但是其细胞体外侵袭能力显著下降(穿膜细胞数为49.3±5.9 vs 98.7±6.8, P<0.01)。原位杂交结果显示TFPI-2基因在正常人肝组织中大量表达,在硬化肝中表达很少,肝癌组织中几乎不见表达。结论:证实了TFPI-2在正常肝组织中有高丰度的表达,而在硬化肝、肝癌组织中TFPI-2的表达显著抑制。TFPI-2的表达可以显著的抑制肝癌细胞的体外侵袭能力,为将来应用蛋白酶抑制剂治疗肝癌,以及干预肿瘤侵袭、转移提供了靶向依据。