芒(Miscanthus sisensis)是新兴生物能源植物之一，为禾本科多年生C4草本植物，高可达4m，丛生状，中国也是其起源地。作为第二代纤维质乙醇的原料，因其生长速度快，矿物含量低和生物量高等优点，倍受人们青睐。第二代纤维质乙醇以木质纤维素为原料，但木质素很难被利用，增加了纤维质乙醇的生产成本，因此进行木质素生物合成调控方面的研究意义重大。 RNA干扰(RNA interference，RNAi)技术是通过双链RNA的介导特异地降解相应序列的mRNA，从而导致转录后水平的基因沉默。RNAi作为一种简单快速、特异、高效、经济、效果可预测的技术，具有明显的优点，它比反义核酸技术优越，比基因敲除简单，具有很好的应用前景，已被广泛应用于植物基因功能研究。 本文选用芒属植物(Miscanthus sinensis)为试验材料，以木质素合成的关键酶COMT、4CL，CCR、CAD为对象，进行了编码基因片段的克隆、RNAi载体构建等方面的研究，主要的试验结果如下： 1.基因片段的克隆与序列分析：用Trizol试剂从芒的幼苗提取总RNA，根据不同植物目的基因同源性较高的区域设计特异引物；利用RT-PCR技术克隆到4个基因片段，其中COMT、4CL、CCR和CAD的核苷酸序列长度分别为481、481、448和439bp，经序列分析证明这些片段为目的基因片段，可用于构建RNA干扰载体。 2.RNA干扰载体的构建：各目的基因片段经BP反应、LR反应后连接到质粒pMGRNAi上，分别用CaMv35S和 Primer-R，CaMv35S-Ferminate和Primer-R，Primer-L和Primer-R等三对引物进行菌液PCR验证，发现各目的基因片段已成功插入到目的载体的两个位点上，证明RNA干扰载体构建成功。 3.通过冻融法将表达载体进行农杆菌转化，菌液PCR检测结果表明获得了含有表达载体的农杆菌LBA4404菌液。通过继代培养15代时后，对含有表达载体的农杆菌进行PCR检测，结果表明，含有表达载体的农杆菌LBA4404菌液具有良好的遗传稳定性。