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目的:探讨中医治疗肺纤维化的思路和有效中药成分。观察蛇床子素(osthole,OST)对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的的小鼠肺纤维化的影响,并从TGF-β1/Rac-1介导的氧化应激角度探讨蛇床子素抗肺纤维化的机制。方法:研究古代文献中关于“肺痿”的论述,探讨肺纤维化在中医学中的内涵;分析“肺痿”的病因病机,探讨中医治疗肺纤维化的理法方药。融合张伟教授的临床经验和理论,兼述从温补肾阳等角度论治肺纤维化的思路。并从中医治疗肺纤维化的中药(如前胡、当归、白芷、补骨脂、蛇床子)中,筛选出具有抗肺纤维化作用的单体蛇床子素。然后通过体内及体外实验对蛇床子素抗肺纤维化的作用及机制进行验证、探索。体内实验:C57BL/6J小鼠随机分为4组:对照组(control)、博来霉素组(BLM)、博来霉素+蛇床子素组(BLM+OST)、蛇床子素组(OST)。采用气管内一次性滴注博来霉素(3.5mg/Kg)的方法建立实验性肺纤维化小鼠模型。从造模当天起,博来霉素+蛇床子素组、蛇床子素组给予蛇床子素(40mg/kg体重)灌胃,对照组、博来霉素组给予溶媒0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液灌胃,每日一次。28天后,处死各组小鼠,取出肺脏,计算肺指数。固定右肺下叶,用于HE染色、Masson染色,观察肺组织炎症、纤维化程度。其余肺组织液氮冻存:使用ELISA方法检测肺组织TGF-β1含量;使用Western blot方法检测肺组织中TGFβ-1、Rac1等蛋白表达水平;测定各组小鼠肺组织中羟脯氨酸含量以及丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)等指标。体外实验:使用TGF-β1和/或不同浓度的蛇床子素刺激原代小鼠肺成纤维细胞(MLF)48小时。LDH实验中细胞分为5组:对照组、蛇床子素(0.1μmol/L)组、蛇床子素(1μmol/L)组、蛇床子素(10μmol/L)组、蛇床子素(50μmol/L)组。其余实验中细胞分为5组:对照组、TGF-β1组(10ng/ml)、TGF-β1+蛇床子素(1μmol/L)组、TGF-β1+蛇床子素(10μmol/L)组、TGF-β1+蛇床子素(50μmol/L)组。使用乳酸脱氢酶试剂盒、细胞增殖-毒性检测试剂盒、细胞计数法、~3H-脯氨酸掺入实验检测各组肺成纤维细胞的死亡、增殖和胶原合成能力;使用Western blot技术检测各组细胞胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、Rac-1蛋白表达水平;细胞免疫荧光技术检测MLF波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在细胞内的定位及表达水平;使用DCFH-DA检测细胞内活性氧水平。结果:肺纤维化在中医学属于“肺痿”的范畴,证属本虚标实,在论治中除了要重视祛除邪气,还需注重扶助正气,尤其是扶助肾阳。蛇床子具有温肾壮阳的功效,其所含的天然化合物蛇床子素,具有显著的抗实验性肺纤维化作用。体内实验:(1)蛇床子素(40mg/kg体重)灌胃可以改善BLM导致的小鼠体重减轻,降低肺指数;(2)HE染色结果显示,蛇床子素可以改善纤维化小鼠肺组织的炎症;(3)Masson染色结果显示,蛇床子素可以改善纤维化小鼠肺组织纤维化程度。另外,肺组织中羟脯氨酸含量也相应降低;(4)ELISA和Western blot结果显示,蛇床子素可以降低纤维化小鼠肺组织中TGFβ-1、Rac-1表达水平;(5)蛇床子素可以降低纤维化小鼠肺组织中MDA(氧化应激指标)的表达水平,升高T-SOD、T-AOC等抗氧化指标的水平。体外实验:(1)0.1-10μM浓度的蛇床子素对小鼠肺成纤维细胞(MLF)没有毒性(P>0.05);(2)蛇床子素能够抑制TGF-β1诱导的MLF增殖和胶原蛋白合成增加;(3)蛇床子素能够抑制TGF-β1诱导的MLF的α-SMA表达和表型转化;(4)蛇床子素能够浓度依赖性地抑制TGFβ-1诱导的MLF细胞Rac-1蛋白表达和ROS生成。结论:蛇床子素可以明显改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化,其机制可能与抑制肺成纤维细胞TGF-β1/Rac-1表达、降低肺组织氧化应激水平相关。