【摘 要】
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体色是生物的一个重要的生物学性状,在生物的伪装、生存、求偶、繁衍、生殖等生命活动中起着重要的作用。鱼类体色是最为丰富的表型性状和重要的种质特征之一,是研究性状遗传规律和决定基础的经典材料。虽然国内外开展了大量的鱼类体色研究,报道了对鱼类体色可能产生影响的200多个基因,但对鱼类体色变异起决定性作用的基因的报道却极少。实验室前期的研究发现类胡萝卜素是瓯江彩鲤体色的主要色素类型,并且类胡萝卜素吸收和转
【基金项目】
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国家自然科学基金:“应用全基因组重测序和基因编辑技术研究鲤体色进化与变异的分子基础”(31772840); 广西科技重大专项“罗非鱼、泥鳅和瓯江彩鲤等稻渔综合种养模式研究与示范”(桂科 AA17204095-7);
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体色是生物的一个重要的生物学性状,在生物的伪装、生存、求偶、繁衍、生殖等生命活动中起着重要的作用。鱼类体色是最为丰富的表型性状和重要的种质特征之一,是研究性状遗传规律和决定基础的经典材料。虽然国内外开展了大量的鱼类体色研究,报道了对鱼类体色可能产生影响的200多个基因,但对鱼类体色变异起决定性作用的基因的报道却极少。实验室前期的研究发现类胡萝卜素是瓯江彩鲤体色的主要色素类型,并且类胡萝卜素吸收和转运相关基因Scarb1在瓯江彩鲤体色调控中发挥重要的作用,但目前为止关于本基因的研究不多。为了更全面的了解Scarb1基因在瓯江彩鲤体色调控中的作用和在动物体色表型中的影响,本研究以瓯江彩鲤为研究对象,对Scarb1在体色调控中的作用进行初步研究。具体结果如下:1.瓯江彩鲤体表色素细胞观察与Scarb1基因组织表达分析鱼类体表一般包含了多种类型的色素细胞,不同的色素细胞及其排列组合构成了鱼类体表五彩斑斓的体色。本章通过对野生型四种体色的瓯江彩鲤鳞片上色素细胞的观察,确定了瓯江彩鲤鳞片上主要包含了黄色素细胞、红色素细胞、黑色素细胞和虹彩细胞,不同的体色鳞片上所含有的色素细胞种类有所不同。随后对四种体色瓯江彩鲤的各个组织中类胡萝卜素的总含量进行了ELISA酶联免疫反应分析测定,结果发现这四种野生型瓯江彩鲤的各个组织中类胡萝卜素含的差异并不显著,主要在“粉玉”与其他体色皮肤之间存在显著差异。四种体色瓯江彩鲤的肠道、血液、眼睛、皮肤、肌肉和鳍条的表达分析发现,四种体色瓯江彩鲤的肠道中表达量最高,说明该基因对类胡萝卜素在肠道中的吸收过程中发挥着重要作用。同时,Scarb1基因在“大花”和“粉花”的眼睛和皮肤中有相对较高的表达量,说明Scarb1基因可能与黑色素通路或者黑色素细胞的形成相关。2.野生型和Scarb1敲除型两种体色的色素相关性状比较分析本章对基因编辑突变型F1和野生型的“全红”、“粉玉”体色瓯江彩鲤个体的鳞片色素细胞和类胡萝卜素含量进行了观察和测定。结果显示:野生型“全红”体色瓯江彩鲤的鳞片含有黄色素细胞、红色素细胞和虹彩细胞,而敲除型“全红”体色的鳞片上只有黄色素细胞和虹彩细胞,而没有红色素细胞。野生型和敲除型“粉玉”瓯江彩鲤的鳞片色素细胞均为虹彩细胞,没有黄色素和红色素细胞。野生型“全红”个体的肠道、血浆、肌肉和皮肤中的类胡萝卜素含量均显著高于敲除型“全红”个体(P<0.05);野生型“粉玉”个体的肠道、肌肉和鳍条中的类胡萝卜素含量也显著高于敲除型“粉玉”个体(P<0.05)。以上研究结果表明,将Scarb1基因敲除影响了瓯江彩鲤体表红色素细胞的生成,该基因在瓯江彩鲤红、白体色调控中发挥作用。3.瓯江彩鲤Scarb1基因5’非编码区SNP位点与体色相关性分析在前期的研究实验中发现,瓯江彩鲤的Scarb1基因检测到208个SNP位点,其中3个位于Scarb1基因的5’UTR,且一个SNP位点符合红、白体色的显隐性关系。本章通过随机选取203条野生型“全红”、“粉玉”体色的瓯江彩鲤进行了DNA的扩增和序列比对后发现,三个SNP位点在“粉玉”体色均为纯合基因型(AA/CC/CC),而在“全红”体色中除了纯合基因型(AA/CC/CC)外,还有四种杂合基因型(AG/CC/CC、AG/CC/CT、AG/CT/CC、AG/CT/CT),但未发现三个位点与瓯江彩鲤的红色和白色体色有相关性。
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