固态发酵豆粕生产大豆肽及其功能特性研究

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本文以大豆粕为原料,以枯草芽孢杆菌(B Subtilis GA15)为菌种,探讨固态发酵制备大豆肽的工艺特点,通过优化,确定了大豆肽制备的工艺参数,一步发酵法:发酵温度30℃、基质层厚度1.75cm及基质含水量44%,发酵72h;两步发酵法:初始发酵条件为发酵温度30℃、基质层厚度1.75cm及基质含水量44%,发酵44h后发酵温度转变为40℃,再发酵28h。发酵结果表明两步发酵法更适合大豆肽的生产,发酵72h后,两步发酵法发酵的大豆肽含量高达19.75%,比一步发酵法高6.45%。SDS-PAGE实验表明,豆粕经72h的发酵,其脂肪氧化酶完全降解,而7S的α′-、α-、β-亚基与11S的酸性亚基和碱性亚基有不同程度的降解。一步发酵法发酵时,α′-含量减少了71.95%、α-减少58.53%、β-减少86.55%、酸性亚基减少59.46%、碱性亚基减少48.18%;两步发酵法发酵时,α′-含量减少了89.39%、α-减少87.31%、β-减少100.00%、酸性亚基减少94.86%、碱性亚基减少70.66%。分子量分布结果表明,在固态发酵过程中,由于微生物与蛋白酶的降解作用,大豆蛋白的分子量向分子量减小的方向移动,发酵72h时,大约45.92%(一步发酵法)与56.33%(两步发酵法)的大豆蛋白转变分子量<10000Da的大豆肽。氨基酸分析表明,在固态发酵过程中,枯草芽孢杆菌(B Subtilis GA15)的增殖与代谢活动消耗了豆粕的部分营养物质,氨基酸总含量先上升后下降,但必需氨基酸含量显著上升,而大部分非必需氨基酸含量显著减少。游离氨基酸的含量随发酵时间呈线性上升,发酵72h,游离氨基酸总含量达34.568mg/g(一步发酵法)与35.727mg/g(两步发酵法)。豆粕的粒度分布与电镜观察表明,在固态发酵过程中,微生物与蛋白酶对大豆蛋白的降解作用发生在豆粕颗粒表面,随发酵时间的增加,其作用向豆粕颗粒内部延伸,两者的降解作用使豆粕粒径逐渐减小,发酵72h,豆粕的粒径由64.76μm减小到28.98μm(一步发酵法)与28.38μm(两步发酵法)。提取温度30℃、提取时间10min,提取液pH4.0时,可得纯度较高,分子量<10000Da的大豆肽,其提取率可达87.99%,进一步的实验分析表明大豆肽氨基酸组成与大豆蛋白相似,在酸性与中性条件下溶解度几乎达到100%,而且能促进酵母的生长,有效清除超氧阴离子自由基,大豆肽对邻苯三酚自氧化的抑制率最高可达101.59%(一步发酵法)与98.56%(两步发酵法)。
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