湖北省核盘菌多样性及田间油菜花朵带菌率与菌核病发生关系的研究

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油菜菌核病菌是一种重要的植物病原菌,分布在世界各地,油菜菌核病在中国是油菜上最严重的疾病之一,给油菜生产造成巨大的损失。本研究选取103个采自湖北省不同地区和寄主的核盘菌菌株,对其生物学特性和遗传多样性进行研究;同时用分子手段检测了田间油菜不同花期的花朵带菌率,并将其与田间子囊盘数量、病害发生率进行了相关性分析。2013年从湖北省7个市的12个采集点的9种寄主的发病植株上采集菌核,共分离得到153个核盘菌单菌核菌株。根据菌株的地理来源和寄主来源,选取了103个菌株,对其生长速度、菌核产量、菌落颜色、致病力及草酸产量进行了测定。结果表明,菌株在PDA培养基上的生长速度、菌核产量及在本氏烟叶片上致病力等方面具有显著差异。菌株的平均生长速度为20.9mm/day,菌株的平均菌核产量(干重)为0.27g/皿,菌落颜色分为黑色(10%)、米色(23%)和白色(67%)三种,菌株的草酸产量与菌株的生长速度呈正相关。以本氏烟叶片作为接种对象,对所有菌株进行离体菌丝块接种,结果表明接种40h后菌株产生的平均病斑直径为28.6mm。每个寄主上选取2个代表菌株在所有寄主上进行致病力测定,结果表明不同寄主来源菌株在各个寄主上的致病力没有明显差异。从这103个菌株中选取了96个菌株用菌丝体亲和群(MCG)测定了菌株的遗传多样性,总共得到71个菌丝体亲和群(MCGs),其中17个菌丝体亲和群含有2-5菌株,其余54个亲和群只含有一个菌株。另外,我们还采用8对微卫星标记引物对96个核盘菌菌株进行遗传多样性研究。8对引物均能稳定扩增出清晰的条带,共扩增出43条带,条带的片段大小在152-385bp之间。根据不同地理来源、不同寄主来源的菌株群体间的Nei氏遗传距离,构建系统进化树,结果显示遗传距离的远近与地理位置的远近、寄主亲缘关系的远近没有明确的关系。运用Powermaker软件基于Nei氏遗传距离对供试96个核盘菌进行聚类分析,结果表明菌株间存在较高的遗传多样性,这些菌株分为多个聚类群,但这些聚类群与菌丝体亲和群包含的菌株有比较大的差异。另外,我们还用STUCTURE软件对96个核盘菌菌株进行了群体结构分析,结果表明这96个菌株菌株属于两个不同的类群。2013、2014年,我们采用巢式PCR的方法,检测湖北黄州和武穴两地区棉花-油菜和水稻-油菜两种类型田块油菜植株的花朵带菌率。结果表明,两地区两种类型油菜田花朵带菌率的变化趋势相同,初花期开始逐渐升高,盛花期达到最高,之后又逐渐降低。两地区棉花-油菜田的花朵带菌率都高于水稻-油菜田的。接着,我们将不同花期的花朵带菌率,核盘菌子囊盘数量,和病害发生率进行相关性分析。结果表明,子囊盘数量、病害发生率与不同花期花朵带菌率均存在正相关关系。
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