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目的:1、观察不同浓度的芦荟提取物对内毒素刺激的成纤维细胞增殖的影响;2、探讨芦荟提取物对大鼠直肠损伤模型的治疗作用及其机制,为临床应用芦荟提取物治疗促进肛门部疾病术后创面愈合提供理论和实验依据。
方法:
实验Ⅰ.观察不同浓度的芦荟提取物对内毒素刺激的成纤维细胞增殖的影响:实验随机分成对照组、LPS刺激组、给药组,其中给药组:用不同浓度(0.5 g/ml、0.25g/ml、0.1g/ml)的芦荟提取物分别作用于内毒素(LPS)刺激12小时的L929小鼠成纤维细胞株24小时,通过MTT(四氮甲唑蓝)法检测芦荟提取物对内毒素(LPS)刺激的成纤维细胞增殖的影响;应用荧光倒置显微镜(德国莱卡)观察各组细胞的形态学改变;
实验芦荟提取物对大鼠直肠损伤模型治疗作用及其机制的实验研究:动物模型制备于玻璃棒一侧头端包裹细砂纸并固定,包裹后的棒端直径约1cm,将该棒缓插入大鼠肛门内约3cm,反复旋转磨擦,造成局部粘膜层损伤、出血。按付小兵等[1]方法要求,随即于组织损伤处(距肛门3cm处)取对称两点各注入培养基菌液0.25ml,使之创面感染。2.取健康wistar大鼠30只,随机分为正常对照组、模型组、芦荟提取物治疗组。芦荟提取物治疗组在造模后8小时,连续治疗7天后,取各组大鼠直肠组织行蛋白质含量(考马斯亮蓝法)、髓过氧化物酶(MPO)、成纤维细胞数测定,以及组织学检查。
结果:
实验Ⅰ:与对照组比,LPS刺激组形态学观察有明显改变,LPS显著抑制成纤维细胞的增殖(P<0.001),镜下表现为细胞稀疏,生长减慢,细胞形态拉长;与LPS刺激组比,加入不同浓度(0.5 g/ml、0.25g/ml、0.1g/ml)的芦荟提取物后,可以不同程度地减轻LPS的抑制作用,成纤维细胞的增殖恢复,各组形态学观察也有相应程度的改变,其中以大剂量组最为明显(P<0.01),并且呈现剂量依赖性,光学显微镜镜下表现为细胞生长恢复,基本融合成片,呈梭形生长。
实验Ⅱ:与正常对照组、模型组比,芦荟提取物治疗组:肠组织蛋白质含量测定(20.23±6.45μg/mg)),MPO测定(0.98±0.22 u/g),肠组织成纤维细胞数测定(48.9±9.2个/视野),均有统计学意义(P<0.01)。与正常对照组、模型组比,芦荟提取物治疗组:H E染色,肠病理组织学检查上皮基本完整,浆膜层基本正常。
结论:内毒素(LPS)可以显著抑制体外成纤维细胞的增殖,镜下表现为细胞稀疏,生长减慢,细胞形态拉长。芦荟提取物对LPS刺激的成纤维细胞增殖有保护作用,可以拮抗LPS的抑制作用,恢复成纤维细胞的增殖,提示芦荟提取物可以通过促进成纤维细胞的增殖而促进直肠创面组织的愈合。3.芦荟提取物对大鼠直肠损伤模型有显著的治疗作用,实验结果提示可能是通过减轻受损组织的炎性反应、促进成纤维细胞增生等作用,而起到抗炎、促进愈合的作用。