目的研究Rap1b在肝细胞肝癌发生发展过程中的作用及其相关机制探讨。方法1.采用免疫组织化学染色和q RT-PCR技术,检测Rap1b在人肝癌组织和癌旁组织中表达情况。采用q RT-PCR和western blot方法,检测肝癌细胞中Rap1b的表达情况。2.运用基因重组技术构建Rap1b过表达质粒和合成Rap1b的干扰片段。转染入肝癌细胞系中,采用MTS和克隆形成实验,分析Rap1b对HCC增殖功能的影响。采用划痕实验和transwell实验,检测Rap1b对HCC侵袭和迁移功能的影响。3.运用分子生物学技术及查阅相关文献,选取影响肿瘤细胞侵袭和迁移功能的分子。运用q RT-PCR方法,检测Rap1b对相关分子表达量的影响。采用蛋白质印迹技术,测定预测靶基因在蛋白水平的变化。再选用双荧光素酶报告基因实验,测定Rap1b与靶基因启动子之间的关系。4.在裸鼠体内,成瘤实验测定用于分析肿瘤形成能力。肿瘤迁移试验用于分析肿瘤迁移能力。结果1.Rap1b在人肝癌组织和肝癌细胞中表达量升高。2.Rap1b在体外促进肝癌细胞的增殖与侵袭迁移功能。3.Rap1b通过增强其启动子活性从而上调Twist1表达量。4.Rap1b在体内能够促进肿瘤的形成与迁移侵袭能力。结论Rap1b通过靶向Twist1从而影响肝癌细胞的发生发展。