荷叶黄酮苷与苷元的制备及其降血糖初步研究

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荷叶是一种重要的药食两用资源,广泛分布于我国大部分地区,黄酮类物质是其主要的活性成分。为了有效利用荷叶资源,本论文研究了荷叶总黄酮的提取、纯化及其微生物酶法制备荷叶黄酮苷元的工艺条件,并初步比较了荷叶黄酮苷和苷元的降血糖及抗氧化效果。超声波能对荷叶组织产生明显的破碎作用,超声波辅助提取荷叶总黄酮工艺的最佳条件为:采用40倍50%的乙醇溶液,在700 W的功率(20 KHz)下超声提取40 min的提取效果最好,其黄酮得率可达14.49 mg/g。纤维素酶法辅助提取荷叶黄酮的较佳条件是:采用0.5%的纤维素酶溶液在pH为4.5,温度为45~50℃的缓冲液中酶解80 min后,再采用50%的乙醇溶液75℃条件下浸渍提取。它们比传统的温浸法效率更高,节省能源和溶剂。大孔吸附树脂HPD600用来纯化荷叶总黄酮的效果较好,在pH为3.2左右时HPD600对荷叶黄酮的吸附量最大,使用80%的乙醇溶液解吸效果最好。当动态吸附的泄露点是4倍柱体积时,5倍柱体积80%的乙醇溶液可以洗脱完全。经初步纯化得到总黄酮含量为58.2%的粉末。为提高荷叶黄酮的生物效价,使用黑曲霉产生的β-葡萄糖苷酶可以较完全的酶解荷叶黄酮苷,得到槲皮素含量达75.34%的黄酮苷元,HPLC-MS分析证明了水解比较完全。在酶/底物为3:1,pH为4.5和温度为45℃的条件下,酶解效率较高。转化体系的量会影响转化完全需要的时间,25 mL荷叶黄酮(1.64 mg/mL)反应6.5 h可以近乎完全的酶解。采用四氧嘧啶糖尿病小鼠模型,初步考察了荷叶黄酮苷元和黄酮苷的抗氧化和降血糖效果。结果表明:荷叶黄酮苷元高、低剂量组均能显著升高肝组织的SOD、CAT活力(P<0.01);高剂量组能显著降低MDA水平(P<0.01),升高GSH-Px活性(P<0.05)。荷叶黄酮苷的高剂量组也能显著升高肝组织的CAT的活力(P<0.05)和SOD含量(P<0.05),显著降低MDA水平(P<0.05)。荷叶黄酮苷元的抗氧化活性明显优于黄酮苷。荷叶黄酮苷元的高剂量组能显著降低糖尿病小鼠的血糖水平(P<0.05),黄酮苷元能改善糖尿病的并发症。
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