论文部分内容阅读
目的 阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是老年人神经系统变性疾病。其突出病理特征是脑神经细胞外β-淀粉样蛋白（Aβ）沉积与淀粉样斑块形成,tau蛋白过度磷酸化与神经原纤维缠结。近年来突触的病理改变在AD发病中的作用日益受到重视。有研究表明,突触丧失是AD痴呆的结构基础。生长相关蛋白（growth-associated protein43,GAP-43）和突触素（synapsin）作为突触前膜和突触囊泡的结构成分,均为神经出芽反应代表性的结构蛋白,检测这两种指标,可以较好的反映神经系统对损伤反应的可塑性,即可作为突触的功能标记。 本实验拟采用这两种突触蛋白作为突触改变的标记物,以研究神经毒性最常用的细胞株—PC12细胞为研究对象,采用免疫组化方法,观察Aβ1-40对PC12细胞突触素和生长相关蛋白的影响,进一步探讨AD患者突触丧失的可能机制,为AD的预防和治疗提供实验数据。 实验材料与方法 将PC12细胞（由中国科学院北京细胞生物研究所提供）进行培养,待镜下PC12细胞突起伸展得较好时用于实验。将24孔培养板的PC12细胞随机分为两组。实验组:每孔中加入含10ug/mlAβ1-40的10%马血清和5%胎牛血清的RPMI1640培养基;对照组:加入含等剂量的生理盐水的10%马血清和5%胎牛血清的RPMI1640培养基;每组设0h,2h,4h,6h,12h时间点,每个时间点设6个孔。在不同的时间点,将细胞用4%多聚甲醛固定,用兔抗GAP-43单克隆抗体和小鼠抗突触素单克隆抗体检测GAP-43和突触素的表达,DAB显色,苏木素复染,常规乙醇脱色,二甲苯透明,镜下观察。采用显微图像分析系统进行灰度定量分析。每组数据以均数±标准差