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第一部分:卵巢癌细胞PCDGF表达与其增殖、侵袭能力相关性的研究.目的:研究人卵巢癌细胞PCDGF的表达,探讨其与卵巢癌恶性表型的关系.方法:应用半定量RT-PCR和Western blot分别检测3株卵巢癌细胞中PCDGF mRNA和蛋白表达水平.单层细胞增殖实验测定3株卵巢癌细胞的增殖能力;Boyden小室体外侵袭实验测定不同细胞株的侵袭能力.结论:3株卵巢癌细胞PCDGF mRNA和蛋白表达水平与其增殖、侵袭能力呈正相关(前者r<,1>=0.97,r<,2>=0.89,后者r<,1>=0.85,r<,2>=0.84),提示PCDGF在卵巢癌发生演进中可能作为独立因素起多种作用,有望成为治疗的新靶点.第二部分:PCDGF反义RNA真核表达载体的构建与转染.目的:特异性封闭高度恶性人卵巢癌细胞株Sw626、A2780中PCDGF的表达,并观察其对增殖能力的抑制效应.方法:RT-PCR技术扩增PCDGF基因cDNA保守序列,经pGEM-T Easy载体克隆后双酶切,反向插入哺乳动物真核表达载体pcDNA3.1(+)中构建反义PCDGF核酸载体.并通过脂质体法转染人卵巢癌细胞株Sw626、A2780,应用RT-PCR和Western blot技术检测转染前后PCDGF mRNA和蛋白的表达.结论:PCDGF反义核酸在高度恶性人卵巢癌细胞株Sw626及A2780中发挥了特异性封闭作用.为进一步研究PCDGF的分子生物学特性及致瘤机理及今后利用反义PCDGF核酸载体治疗卵巢癌提供实验和理论模型.第三部分:PCDGF反义核酸载体对高度恶性人卵巢癌细胞增殖、侵袭能力的抑制效应及相关机制的研究.目的:观察PCDGF反义核酸载体对高度恶性人卵巢癌细胞株Sw626、A2780生物学行为的抑制效应,并初步探讨其相关机制.方法:MTT实验检测增殖能力的变化,Boyden小室体外侵袭实验测定侵袭能力.并应用Western blot技术检测转染前后CyclinD1、CDK4蛋白表达的变化,RT-PCR和明胶酶谱法分析MMP-2表达和活性的改变.结论:PCDGF反义核酸可显著抑制高度恶性人卵巢癌细胞株Sw626及A2780的增殖、侵袭能力,部分逆转其恶性表型.这可能与其下调CyclinD1、CDK4蛋白的表达,抑制MMP-2酶原的活性有关.提示PCDGF可以作为卵巢癌治疗的新靶点.