研究背景: 随着当今社会人们饮食结构的改变和社会老龄化加快,缺血性脑血管病(ischemic cerebral vascular disease, ICVD)已经成为威胁人类健康与生存的主要疾病之一。ICVD的治疗主要包括对危险因素的控制、针对病理生理机制的治疗以及对坏死神经细胞的替代治疗,但是ICVD的临床治疗效果一直不佳。以往认为神经细胞是不可再生的,但是大量对于神经干细胞(neural stem cells, NSCs)的研究表明神经细胞可以在某些特定的条件下再生,这使得干细胞治疗成为治疗ICVD的一种全新的最有价值的潜在治疗手段。目前神经干细胞治疗ICVD的实验研究,包括移植神经干细胞和激活内源性神经干细胞(endogenous neuralstem cells, ENSCs)两种。成年哺乳动物中枢神经系统中存在两个神经干细胞聚集区：侧脑室壁的室管膜下区(subventricular zone, SVZ)和海马齿状回的颗粒下层(subgranular zone, SGZ),这两个区的干细胞能够增生、分化、迁移。通过外源性诱导创造脑缺血后NSCs激活的内部条件,促进其功能恢复,将为内源性NSCs的临床应用开辟广阔的前景。 中药回神颗粒是由川穹、丹参、远志、石菖蒲、郁金、灵芝、制附子、淫羊藿、鹿茸、当归等组成的中药复方制剂。是在长期临床实践中,深刻洞悉脑梗死的病因病机,不断总结用药经验的基础上研制而成的治疗脑梗死的有效中药制剂,在I期临床中显示出良好的临床疗效,初步实验证实它能抑制神经细胞的凋亡。 目的: 通过建立小鼠慢性脑缺血模型并给予中药回神颗粒治疗,记录各组小鼠行为学和长时程增强(long-term potentiation, LTP)等数据并进行脑片HE染色和nestin蛋白免疫组化,同时通过研究回神颗粒治疗脑缺血小鼠脑匀浆提取物对PC12细胞的作用,探讨回神颗粒的脑保护作用及其可能的机制。 材料与方法: 采用永久性结扎左侧颈总动脉的方法建立慢性脑缺血模型,24只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为四个组,每组6只小鼠,分别为模型组；模型组+回神颗粒治疗(HS)组：建模24小时后,回神颗粒中药(1.95mg/g,每次0.1ml)灌胃一个星期；HS组：中药灌胃一个星期及对照组。缺血模型建立后一个星期进行水迷宫和LTP检测。实验结束后小鼠麻醉取脑,进行HE染色和Nestin蛋白免疫组化。同时提取小鼠脑匀浆提取物检测对PC12细胞的影响。 结果: 1、水迷宫定向航行实验中模型组潜伏期较对照组潜伏期长,模型+HS组潜伏期和对照组无显著性差异,HS组潜伏期较对照组稍短,但是差异并不明显。空间探索实验中模型组穿越平台次数和第三象限游泳时间百分比都较对照组穿越显著减少,模型+HS组穿越平台次数和第三象限游泳时间百分比和对照组无明显差异,HS组穿越平台次数和第三象限游泳时间百分比较对照组稍多,但无统计学差异(P>0.05)。 2、模型组群体峰电位(population spike, PS)幅值和兴奋性突触后电位(excitatory post-synaptic potential, EPSP)斜率较对照组和模型+HS组低,有显著性差异(P<0.05)。模型+HS组PS幅值较对照组低,但EPSP斜率和对照组无显著性差异。HS组PS幅值和EPSP斜率和对照组无统计学差异(P>0.05)。 3、四甲基偶氮唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)实验中培养12h、24h、36h和48h,模型组、模型+HS组、HS组和对照组MTT比色法的吸光度(A)值均较空白对照组有明显增加(P<0.01)。且模型+HS组的吸光度值显著大于其他组(P<0.05),组间有显著性差异(P<0.05)。 4、nestin免疫组化染色结果示模型+HS组表达强阳性,模型组阳性,HS组弱阳性和对照组弱阳性。 结论: 回神颗粒对脑缺血小鼠有较好的神经保护作用。作用机制可能是：给予脑缺血小鼠回神颗粒治疗后,回神颗粒诱导脑组织产生某些促细胞增殖的因子,这些因子与缺血损伤刺激信号结合显著增强神经干细胞和祖细胞对损伤的应答反应,从而产生更多的新生神经细胞,这些新生神经细胞整合到已经存在的大脑环路中,改善了损伤引起的神经功能障碍。