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本研究分离并鉴定了一株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),即猪蓝耳病病毒,经病毒生物学特性测定、病毒基因鉴定、血清学试验,确定该分离毒株为美洲型PRRSV,将其命名为JL/07/SW株。根据美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒VR-2332株及变异毒株的核苷酸序列,针对N基因、Nsp2变异序列、以及GP5基因设计合成了的特异引物,扩增出正确的目的基因序列,测定序列经比对后,发现该毒株与美洲型毒株的同源性高于欧洲型,故判断该毒株属于美洲型变异毒株,本分离毒株其基因组在Nsp2上缺失了30个氨基酸,而GP5和M基因也存在变异,但是相对保守。膜蛋白质组是指在特定条件和特定时间细胞中的全部膜蛋白。研究膜蛋白质组的目的在于:更加深入理解膜蛋白在基本生物学过程中的作用;揭示特定细胞类型或病原体细胞表面蛋白质的表达谱,为研究疫苗和生物医学治疗积累数据。本研究应用2D-PAGE及MALDI-TOF MS/MS分析猪繁殖与呼吸综合征病毒体外感染MARC-145细胞及体内感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)差异细胞膜蛋白,揭示PRRSV感染引起的细胞膜蛋白表达变化,筛选并鉴定差异表达膜蛋白,并对部分蛋白进行初步的功能分析鉴定。首先用病毒体外感染MARC-145细胞,经间接免疫荧光试验确定膜蛋白提取时间为病毒感染细胞后48小时,收集约108个病毒感染及正常细胞,加入细胞膜蛋白裂解液,离心后收取上清液作为膜蛋白样品,用BCA法测定膜蛋白浓度后,进行二维凝胶电泳、染色、图像扫描与分析,然后对所选取的差异表达蛋白进行胶内酶解及质谱分析,最后进行Western Blotting分析验证二维凝胶电泳的分析结果,结果共鉴定了12个差异表达蛋白(7个上调蛋白,6个下调蛋白)。同时,本研究进行了体内试验,病毒感染仔猪,在病毒感染急性期时,采取猪臂动脉丛放血致死,获取猪肺泡巨噬细胞,进行二维凝胶电泳及质谱技术鉴定差异蛋白、Western Blotting验证,成功鉴定了17个差异表达蛋白(10个上调蛋白,7个下调蛋白)。其中波形蛋白(vimentin)、丝切蛋白( cofilin)、抗氧化应激蛋白过氧化物酶-6 (PRDX6)、抗氧化应激蛋白过氧化物酶-2 (PRDX2)、热休克蛋白(HSP)、ubiquitin(泛素)等蛋白在感染细胞中差异表达,这些蛋白可能参与了病毒感染、细胞凋亡及机体免疫等过程。对病毒感染的差异膜蛋白vimentin、PRDX2,设计特异引物进行RT-PCR扩增目的片段,构建真核表达质粒,转染细胞,筛选阳性克隆细胞,构建过表达MARC-145细胞,对构建的过表达细胞接种病毒,同时设置正常细胞对照,通过观察细胞病变、测定病毒滴度及实时荧光定量PCR方法检测病毒复制情况。结果表明过表达波形蛋白的MARC-145细胞接种PRRSV后,病毒滴度提高,荧光信号强度增加,病毒GP5基因拷贝数增加,说明波形蛋白可能是病毒受体复合物的部分,在病毒的增殖过程中起到了重要作用。