多发性内分泌腺瘤综合征(Multiple endocrine neoplasia syndrome，MEN)是指在同一患者先后或同时发生两种或以上的内分泌腺肿瘤(或增生)。根据病因及肿瘤的组合不同，MEN综合征又分为MEN-1型和MEN-2型。多发性内分泌腺瘤2型(MEN-2)的主要特征是：甲状腺C细胞增生或甲状腺髓样癌(Medullary thyroidcarcinoma,MTC)、双侧肾上腺嗜铬细胞瘤和甲状旁腺增生或腺瘤。按其表型可以分为三种亚型-MEN2A、 MEN2B、家族性甲状腺髓样癌(Familial medullarythyroid carcinoma,FMTC)及两种变异型：先天性巨结肠症(HirSchspmng病、HSCR)和苔藓样皮肤淀粉样沉着症。在MEN2A患者中，约95％有甲状腺髓样癌，50％伴有嗜铬细胞瘤，20％伴有甲状旁腺增生或腺瘤。 MEN2A是一种常染色体显性遗传性疾病，其外显率几乎高达100％。MEN2A的发病与RET原癌基因突变所致的遗传缺陷有关，不同的突变位点导致了MEN2A的表现型与疾病严重度的不同。自1993年国外首例报道MEN2A患者的RET基因学突变以来，共有超过100个位点突变的报告，MEN2A的突变主要集中在其中8个位点上。国内对MEN2A的研究多为病例报道，分子遗传学的研究尚不多见。 目的：是通过对1个临床拟诊MEN2A大家系RET基因进行多项测序分析，寻找该家系可能存在的RET基因突变，并探寻其分子遗传学发病机制及分析临床特征。 材料与方法：1.研究对象：一个MEN2A大家系，包括先证者两代共22位成员，其中8名为女性，14名为男性。经病理确诊为MEN2A的患者共4例。 2.实验方法：取外周静脉血提取该家系先证者及其家系成员的基因组DNA，采用聚合酶链反应(PCR)扩增RET原癌基因包含的21个外显子，进而对纯化后的PCR扩增产物直接测序及克隆测序，将测序结果与Pubmed上公布的标准序列进行比较分析，判定突变位点及编码氨基酸序列的变化。同时对存在突变的外显子PCR扩增产物行限制性内切酶分析。 实验结果与讨论： 1.4例MEN2A患者均存在exon11 D631密码子(GAC)的杂合缺失，DNA碱基序列由TGCG^ACGAGCTG变为TGCGAGCTG，导致编码天冬氨酸的D631密码子缺失，即D631del；并检测到患者Ⅱ6的一级亲属Ⅲ10为该基因突变携带者。exon11的PCR扩增产物经限制性内切酶Hpy991消化处理后，正常序列可被切分为95bp和243bp的两段，突变序列因缺失酶切位点而不被切分，仍为338b。测序发现的突变点与Cariff医学遗传学院人类基因突变数据库(http：//www．hgmd．cf．at．uk)收录的MEN2A相关RET原癌基因突变比较后，确定为国内外首次报道的新突变位点。 2.RET原癌基因外显子多态性的测定：家系中未携带突变基因者均存在11号外显子G691S杂合子(GGT/AGT)，691号密码子由甘氨酸替换为丝氨酸，而突变基因携带者未见此多态性。 3.基因型与表现型的联系：家系中4名患者均为D631位点突变，虽然每个患者临床表现存在差异，但也表现出此突变位点特有的临床特点，即由此基因型决定的独特的表现型。4名患者的临床表现与常见的D634位点突变不同的是：30岁后才逐渐发现病变；均存在肾上腺嗜铬细胞瘤病变，肾上腺嗜铬细胞瘤可先于甲状腺髓样癌发生；甲状腺髓样癌病变的侵袭力较弱，未见早期淋巴结转移及远处转移；除两个患者iPTH稍增高外，未见甲状旁腺病变。 结论： 1.本研究在RET原癌基因exon11检测到一个新的D631del杂合缺失突变，为国内外首次报道，并认为此突变位点是引起该家系MEN2A发病的主要原因。 2.D631del杂合缺失突变表型特点为发病年龄延迟，肾上腺嗜铬细胞瘤可早于甲状腺髓样癌发生，甲状腺髓样癌侵袭力较弱，未见早期淋巴结转移，未累及甲状旁腺。 3.RET原癌基因检测对MEN2A患者明确诊断及治疗措施有指导意义，并能预测患者直系亲属的发病情况。