论文部分内容阅读
目的：本研究拟制备鼠抗人CD133单克隆抗体杂交瘤细胞株并鉴定其单抗生物活性，为后续制备抗人CD133单链抗体及构建免疫毒素并靶向杀伤喉癌干细胞进行免疫治疗提供前期工作基础。方法:利用纯化的CD133抗原免疫Balb/c小鼠，采用PEG促融合技术，取骨髓瘤细胞SP2/0与上述免疫小鼠脾细胞进行融合，选用ELISA法筛选杂交瘤，培养能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞株，同时多次检测杂交瘤活性和抗体亚型后，扩大培养，阳性克隆冻存。流式细胞术检测抗人CD133单克隆抗体与基因工程CHO（CD133~+）细胞和Hep-2细胞株中CD133~+细胞的结合情况。结果:应用PEG介导细胞融合，共融合96孔培养板8块，融合率约为51.3%。连续克隆化培养，制得1株稳定分泌特异性抗CD133分子的杂交瘤细胞株(aCD133，克隆号为15)，该株单抗经体外连续传代培养。经快速定性试纸法鉴定该单抗亚型为IgG1，轻链为к链，通过流式细胞术检测已制备单抗与CHO细胞和Hep-2细胞中CD133抗原的结合率分别为78.62±8.25%和1.8±0.45%。结论:成功制备分泌抗人CD133单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该单抗具有CD133+细胞特异亲和性。本实验为后续抗人CD133单链抗体的制备及构建免疫毒素并靶向杀伤喉癌干细胞的治疗奠定基础。