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目的:胰高血糖素(Glucagon,GLN)与肝脏胰高血糖素受体(Glucagon receptor,GCGR)结合后,参与调节机体糖脂代谢作用。研究发现14-3-3β蛋白(YWHAB)是GCGR的相关辅助蛋白。目前关于肝脏脂肪变后这两种蛋白表达变化情况以及两者结合后对肝脏糖代谢的具体调节作用还不是很明确。本研究旨在观察GCGR和YWHAB在肝脏脂肪变后的表达水平变化以及YWHAB介导GCGR对肝脏糖异生的调节作用。方法:应用QPCR、Western Blot检测HepG2细胞株、小鼠多种组织、HepG2细胞脂肪变后和ob/ob小鼠肝组织的gcgr和ywhab mRNA、蛋白的表达情况。免疫组化技术(immunocytochemistry)检测ob/ob小鼠和对照小鼠肝组织中两者表达及定位情况。免疫共沉淀法检测YWHAB和GCGR在HepG2细胞中结合情况。过表达及沉默YWHAB后,在有和无胰高血糖素刺激下,用QPCR、Western Blot检测糖异生主要关键酶葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G6Pase)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)mRNA和蛋白表达水平变化。结果:1.GCGR和YWHAB在肝组织和HepG2细胞均有表达;免疫组化结果显示:GCGR在细胞膜上表达,YWHAB在细胞质和细胞核中表达。2.在mRNA和蛋白水平上,ob/ob小鼠肝组织及油酸诱导HepG2细胞脂肪变中GCGR和YWHAB的表达量均比对照组有所降低。3.YWHAB和GCGR在HepG2细胞中结合后,在胰高血糖素的刺激下,YWHAB过表达组中的G6Pase、PEPCK mRNA、蛋白的表达显著下降;YWHAB沉默表达组中G6Pase、PEPCK表达量增加。总结:GCGR和YWHAB在肝脏和HepG2细胞中均有表达。肝脏发生脂肪变后,两者表达量减少。YWHAB可以与GCGR结合,在胰高血糖素的刺激下,抑制肝脏糖异生的作用。