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猪链球菌(Streptococcus suis, SS)是一种重要的人畜共患病病原,是链球菌属。按荚膜抗原的特性,目前分为35个血清型(1-34型和1／2型),其中1型、2型(1／2型)、7型、9型的致病力最强。SS呈世界性流行,对养猪行业和公共卫生安全造成重大的威胁。SS可以致猪败血症、脑膜炎、关节炎等症状,SS2还致人败血症、脑膜炎、肺炎等。对于猪链球菌的致病机理研究的还不是很清楚,发现与许多毒力因子有关系。根据致病的强弱,SS可分为强毒株、弱毒株和无毒株,目前对ss毒性强弱的判定还没有标准,动物实验还是行之有效的方法。本实验对广东省地区的流行株进行了研究,具体如下。1.广东地区猪群中猪链球菌的分离鉴定与分析2007年9月-2008年9月,从广东省各地40多个猪场和2个屠宰场采集猪的肺、肝、心血、脾、淋巴结、扁桃体等器官,在发病猪群中采集187头份病猪的591份病料,屠宰猪群中采集193份扁桃体,202份鼻拭子样品。细菌分离培养后,用PCR方法鉴定SS,对分离到的菌株做1型(或14型)、2型(或1／2型)、7型、9型的血清型做PCR鉴定。发病猪群中72份(38.2%)样品检出SS阳性,其中61份(32.6%)分离得到SS 111株；屠宰猪群中,扁桃体样品检测到28份(14.51%),分离菌株18株(9.3%),鼻拭子样品仅检测到1株阳性,未分离到细菌。血清型鉴定发现发病猪群中39株(36.0%)为SS2型,2株为SS9型(1.8%)未定型为70株(63.2%);扁桃体样品中,6株(33.3%)检测为SS2型,1株为SS7型(5.6%),11株(61.1%)为未定型。分析表明：SS在广东地区比较流行,其中以2型为主,但有63.2%无法定型,且有血清型混合感染或者同其他疾病混合发生的现象,表明广东地区SS流行复杂,防控需要采取多种措施,才可能有效预防。2.猪链球菌分离株主要毒力因子分布特征依据本实验室建立方法,对猪链球菌7种主要毒力因子进行检测,包括溶菌酶释放因子(mrp)、胞外因子(efp)、溶血素(sly)、纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(fbps)、三磷酸甘油醛脱氢酶(gapdh)、谷氨酸脱氢酶(gdh)和毒力相关序列orf2,并合成4种新发现的潜在毒力因子引物,包括38KD-Protein、Sao蛋白、精氨酸脱亚氨酸酶(ads)、次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(impdh)对分离菌株检测。检测结果表明,SS2含有的毒力因子最多,有10种及以上毒力因子的菌株是37株,占82.2%,以cps2/gdh+/sly+/ef+/mrp+/fbps+/gadph+/orf2+/38kD-pr+/impdh+/ads+/sao+基因型为主。2株SS9缺失sly、矿和mrp等主要的毒力因子。1株SS7基因型为cps7/gdh+/sly-/ef-/mrp+/fbps+/gadph+/orf2+/38kD-pr+/impdh-/ads-/sao+。未定型菌株的毒力因子缺失严重,主要含有gdh、gapdh、orf2、38kD-pr、ads毒力因子。3.猪链球菌分离株的生化特性与药物敏感性用微量发酵管法分析18株屠宰猪群分离株和60株发病猪群分离株的生化特性,实验结果发现,猪链球菌易发酵葡萄糖、蔗糖、海藻糖等,对无机盐类等物质不发生发酵反应。结果显示不同地区的菌株的生化特性略有不同。用药敏纸片法检测45株扁桃体分离株和56株发病猪群分离株分析对药物的敏感情况。实验结果表明,80.4%菌株对头孢唑啉和阿莫西林等药敏感,44.4%菌株对乙酰螺旋霉素、氟本尼考、氧氟沙星等中度敏感。62.5%以上的菌株对大环内酯类和四环素类等不敏感。不同地区的菌株对不同药物的敏感度有较大差异,而相同地区的菌株对药物的敏感性差异不大。4.猪链球菌2型免疫抑制小鼠感染模型的初步建立选用18-20g,雄性昆明小鼠,按80mg/kg剂量腹腔注射环磷酰胺,连续注射3d,建立免疫抑制模型。检测江苏分离株HA9801对免疫抑制小鼠的半数致死量(LD50)将小鼠分为7组(A、B、C、D、E、免疫对照组和空白对照组),每组6只小鼠,A-E组,分别注射5×107、1.6×107、5×106、1.6×106、5×105cfu,用Reed-Muench法计算小鼠的LD50,为4.9×106cfu。选择3株流行病学背景不同的菌株A070、A107、ZQ-3,A070和A107为临床发病猪分离株,ZQ-3为屠宰猪群分离株,以HA9801株对免疫抑制小鼠的LD50的剂量,检测其对免疫抑制小鼠的致病性。攻毒之后的小鼠,表现出精神萎靡,厌食,被毛粗乱。剖检病变明显,大脑充血、出血,肝、肺、心等充血、淤血,有的肠道充血、鼓气。在肺、肝、心、脑等多个器官分离到病原。试验结果显示A070对小鼠的致死率为50%,A107对小鼠的致死率为30%,ZQ-3对小鼠的致死率为25%,试验结果表明了免疫抑制小鼠对猪链球菌致病性敏感,能成功复制出病变,较好的区分出菌株毒性的强弱。