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一些酸性脲酶因能够在较低的pH下发挥活性,并且在大部分的低乙醇的酒精饮料中仍具有很高的活性,因而具备在酒类加工中应用的优良潜质。本论文主要对一株产酸性脲酶细菌进行了生理生化及分子生物学鉴定,根据鉴定结果利用在线数据库检索相关家族基因进行生物信息学比对,并在纯化该脲酶蛋白的基础上对该脲酶的一级结构进行了初步探索。根据菌株的个体形态、菌落形态以及部分生理生化实验结果,参照《伯杰氏细菌鉴定手册》第八版,初步鉴定JN_R12为肠杆菌属细菌Enterobacter sp.。结合分子生物学鉴定,对扩增的16S rDNA测序并Blast检索,该菌与Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157:H7 str.Sakai有100%的同源性。该菌所产酸性脲酶在模拟酒中24h内的尿素去除率接近100%,在黄酒中24 h的去除率也达到65.2%。从生物信息学角度,利用核酸、蛋白数据库检索,将包括肠杆菌属细菌在内的微生物脲酶序列进行生物信息学比对,结果表明:肠杆菌科细菌所产脲酶在进化上有很大保守性,同科细菌间基本一致,比较典型的是脲酶操纵子结构,酶分子由若干亚基组成。对该脲酶基因分布情况进行了分子生物学的探索,在E.coli JN_R12中存在肠杆菌属中编码脲酶操纵子的多亚基基因ure。但与报道的脲酶操纵子在结构上存在不同。对粗酶提取条件进行了优化;粗酶经过Ultrogel ACA34凝胶过滤层析、DEAE-52阴离子交换层析及Hitrap Q强阴离子交换层析,最终回收率15.88%,纯化倍数7.28。SDS-PAGE电泳条带进行相关肽谱分析,结果表明,该酶在序列和功能上与脱氮副球菌属(Paracoccus denitrificans PD1222)细菌的脲酶蛋白(gi 69936847)存在较高的相似性,可以初步认为是大肠杆菌属细菌中一种未报道的脲酶蛋白。