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研究背景吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)是催化色氨酸分解代谢的限速酶,能够调控免疫微环境。但目前尚未有研究对IDO1在肝纤维化中的作用机制进行深入探索。中医药在调节免疫与防治肝纤维化领域具有独特优势,大黄(?)虫丸临床上常用于治疗各种原因引起的肝纤维化和肝硬化的治疗。因此,我们通过探索大黄(?)虫丸抗肝纤维化的免疫微环境机制内涵及IDO1靶标调控机制,为肝纤维化有效预防及调控寻找新的分子靶点,同时为肝纤维化预防药物开发提供新的思路。研究方法在动物实验中,利用野生型和IDO1基因敲除型小鼠建立四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化模型,并且应用IDO1抑制剂、大黄(?)虫丸及秋水仙碱干预野生型模型小鼠。造模结束后,利用Western blot和TUNEL染色观察各组小鼠肝细胞损伤凋亡情况;H&E、天狼星红染色、免疫荧光、ELISA、Western blot和qPCR等方法观察肝纤维化程度、IDO1相关蛋白及肝内免疫微环境变化。在临床试验中,招募健康志愿者及肝硬化患者分别纳入对照组和模型组,用ELISA观察受试者血清IDO1水平与肝损伤及硬变程度的关系。结果采用SPSS 22.0统计分析及Graph Pad Prism 6.0作图,以均值±标准差表示。P<0.05为有统计学差异。研究结果首先,IDO1的缺失有着显著的抗损伤和抗纤维化作用,与野生型模型组比较,IDO1敲除肝纤维化小鼠血清ALT和AST、肝细胞凋亡率、肝组织胶原生成、α-平滑肌肌动蛋白、裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、BAX蛋白的表达均降低(P<0.05);肝脏色氨酸2,3-双加氧酶(TDO)和一般性调控阻遏蛋白激酶2(GCN2)的表达增加(P<0.05);白介素(IL-17a)表达和下游细胞因子的mRNA水平降低(P<0.05)。同时,在肝纤维化小鼠及肝硬化受试者中发现血清IDO1水平与肝损伤呈正相关(P<0.05);在肝硬化受试者中,血清IDO1水平与肝硬度值亦呈正相关(P<0.05)。另外,高剂量大黄(?)虫丸可以显著抵抗CC14诱导的肝纤维化损伤,且与模型组比较,高剂量大黄(?)虫丸组小鼠肝组织TDO表达增加(P<0.05),机体IDO1和肝脏IL-17amRNA水平下降(P<0.05)。研究结论在本研究中,证实了 IDO1基因的缺失减轻了肝脏对CCl4诱导肝纤维化的易感性,IDO1基因的缺失能代偿性地上调肝脏TDO表达并降低IL-17a水平,从而影响肝脏炎症因子的释放,抑制星状细胞的活化,改善肝纤维化程度。同时,结合体内实验和临床试验,发现了血清IDO1水平与肝损伤及肝硬化程度呈正相关。最后,证实了大黄(?)虫丸能通过调控机体IDO1的水平对抗CCl4诱导的肝纤维化,为IDO1作为临床治疗肝纤维化重要靶点的可行性提供了理论及实验依据。