真核细胞起始因子5A(eukaryotic initiation factor 5A，eIF5A)是自然界中唯一含有特殊氨基酸hypusine的蛋白质，最初由于被发现参与了蛋白质的翻译启始过程而命名。事实上，eIF5A对于真核细胞大多数蛋白质的合成并非必需，而仅参与部分蛋白质的合成。随后的研究进一步发现，eIF5A还是HIV-1反式激活蛋白Rev发挥作用所必需的胞内协同因子，并参与mRNA的胞核外运，表明它还有其它的功能。 近年来研究进一步发现，eIF5A还与细胞凋亡的发生密切相关，但详细机制并不清楚。我们实验室在阻断泛素通路诱发白血病细胞凋亡的蛋白质组学研究中，发现eIF5A参与了上述凋亡调控，特别是抑制eIF5A的hypusine翻译后修饰能够诱发白血病细胞凋亡(靳宝锋等．Oncogene，2003，22：4819-4830)。本文为进一步揭示eIF5A在细胞凋亡过程中的作用，应用酵母双杂交技术对eIF5A相互作用蛋白质进行了筛选并对其功能进行了初步研究。 结果显示，我们首次发现并系统证明了eIF5A与syntenin之间能够发生特异性的相互作用，并具有重要的功能。在酵母双杂交实验中，我们分别以eIF5A的两个结构域EFP(N末端)和eif5a(C末端)为诱饵，在人类乳腺文库中筛选与其相互作用的蛋白质。在筛选出eIF5A的相互作用蛋白质syntenin后，我们随后从人类乳腺文库中钓取了其cDNA序列，为下一步的结构和功能研究做好准备。为进一步确认eIF5A与syntenin之间存在特异性的蛋白质相互作用，本文进行了体外结合实验(in vitro：GST pull-down)和体内结合实验(in vivo：IP)，并获得了与酵母双杂交发现相一致的实验结果。除此之外，本文还应用激光共聚焦显微镜的FRET(荧光共振能量转移)技术，在活细胞内验证了eIF5A和syntenin存在特异性地相互作用。更进一步，本文构建了eIF5A和syntenin不同功能域缺失的系列突变体，揭示了eIF5A和syntenin发生相互作用的结合区域。摘要 为确定e工FSA和syntenin相互作用的生物学意义，我们成功地在乳腺癌细胞T47D中建立了一套Sox4转录激活荧光报告测试系统。Sox4已知在乳腺癌的发生和发展过程中起着重要的促进作用。进一步分析发现，eIFSA通过与syntenin相互作用，抑制了Sox4的转录激活活性。更进一步，我们还在研究中首次发现，e工FSA的过量表达可以引起p53蛋白质的上调和激活，而syntenin通过与e工FSA结合能够抑制e工FSA诱发的p53过表达。因此，本文所发现的e工FSA和syntenin相互作用复合体可能是一个至今尚未被认识的p53调控因素，进一步研究有可能发现一个涉及曲3调控的全新机制。