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目的:探讨结直肠癌中肿瘤相关成纤维细胞促进结直肠癌肿瘤细胞耐药,增殖及迁移的机制。方法:体外培养原代结直肠癌组织中肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)及普通纤维细胞(NFs),收集肿瘤相关成纤维细胞来源上清(CAF CM)或普通纤维细胞来源上清(NF CM),处理肿瘤细胞。将上清与五氟尿嘧啶(5-FU)共同处理肿瘤细胞,利用Hoechst33342染色观察凋亡细胞形态变化、膜联蛋白V-碘化丙啶(ANNEXIN V-FITC/PI)双染检测肿瘤细胞早期凋亡比例的变化,细胞计数试剂盒(CCK-8)绘制毒性曲线,western法检测GAPDH、LC3、beclin-1的表达水平,并利用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3MA)检测自噬在此过程中的作用。将肿瘤相关成纤维细胞或癌旁正常成纤维细胞和肿瘤细胞置入Transwell共培养系统,脂质体介导HIF1α为靶分子的小干扰RNA(si RNA)转染结肠癌细胞系sw48后,利用流式KI-67流式染色、集落形成实验、流式细胞周期检测测定细胞增殖能力的变化,利用细胞计数试剂盒(CCK8)检测生长曲线,采用western法检测细胞中HIF1α的表达。运用Transwell培养法对肿瘤相关成纤维细胞和肿瘤细胞进行体外共培养,利用划痕实验及Transwell小室检测肿瘤细胞迁移,利用实时定量PCR检测处理后肿瘤细胞EMT相关分子m RNA表达水平,利用外泌体抑制剂GW4869检测外泌体在此过程中的作用,利用2ME检测HIF-1α在此过程中的作用。结果:Hoechst33342染色、ANNEXIN V-FITC/PI双染、Western法检测发现显示,肿瘤细胞5-FU较空白对照组及5-FU+CAF CM组凋亡细胞比例明显上升,3MA+CAF CM+5-FU组凋亡率较CAF CM+5-FU组明显上升,CAF CM+5-FU组较NF CM+5-FU组LC3-B、beclin-1表达增强。si RNA 1~2组HIF1α表达水平明显低于阴性对照组,CAF上清处理组较空白对照组克隆生成率明显增高,流式细胞周期检测显示CAF共培养组与NF共培养组比较G1~Go期下降,S期细胞上升,HIF1αsi+CAF共培养组与CAF共培养组比较G1~Go期上升S期细胞下降,CAF共培养组与NF共培养组比较KI67阳性细胞比例上升,HIF1αsi+CAF共培养组与CAF共培养组KI67阳性细胞比例下降。细胞划痕实验和Transwell小室显示,肿瘤相关成纤维细胞上清处理组较空白组以及肿瘤相关成纤维细胞共培养组较普通成纤维细胞共培养组迁移能力显著上升,去外泌体CAF共培养组较CAF共培养组迁移能力显著下降,而HIF抑制剂不能影响肿瘤相关成纤维细胞对肿瘤侵袭转移的促进作用。结论:肿瘤相关成纤维细胞可以减少结直肠癌对五氟尿嘧啶的药物敏感性,而这一效应可能依赖保护性自噬的增强;肿瘤相关成纤维细胞可以通过间接效应促进结直肠癌肿瘤细胞的增殖,而这一效应可能依赖HIF1α;肿瘤相关成纤维细胞还可以通过外泌体途径促进结直肠癌细胞的上皮间质转化及迁移,并且该过程不依赖HIF1α。