前列腺癌(Prostate Carcinoma,PCa)是一种严重威胁男性健康的常见恶性肿瘤,其发病率位居全球男性恶性肿瘤的第二位,近年来,其发病率在全球仍在急剧增加。前列腺癌的早期发现及早期治疗,可以极大提高患者的治愈率,有效延长患者的寿命。目前,针对前列腺癌的早期诊断方法主要是建立在直肠指检、影像学检查、肿瘤标记物检查和穿刺活检等基础上,存在发现不及时、检测范围局限、易损伤正常组织、易与其它病症相混淆等缺陷,难以对前列腺癌实现早期诊断。因此,筛选获取一种特异性前列腺癌细胞的新型分子识别探针,建立一种简单、迅速、灵敏、特异性强的分子识别早期诊断技术,对前列腺癌的早期诊断和早期治疗具有非常重要的意义。Cell-SELEX技术是近年发展起来的以完整肿瘤细胞为靶标的筛选技术,能从不同类型肿瘤细胞或正常细胞中筛选获得特异性识别靶细胞的核酸适配体探针,筛选得到的核酸适配体可结合天然状态的靶分子,直接用于识别、检测细胞,对癌症早期诊断和分型、肿瘤标记物的发现及肿瘤的发生与发展机制的研究提供了新的契机,在生物医学领域发挥着非常重要的作用。本文基于Cell-SELEX技术,以人前列腺高转移癌为靶细胞,人前列腺低转移癌为对照细胞,在未知细胞表面靶标的情况下,筛选出一种能高亲和力高特异性识别人前列腺癌细胞株的核酸适配体。具体内容如下:1.人前列腺癌PC-3M-1E8细胞株核酸适配体的筛选以人前列腺高转移癌PC-3M-1E8细胞株为靶细胞,人前列腺低转移癌PC-3M-2B4细胞株为对照细胞,利用Cell-SELEX技术,通过增加洗涤次数,增加反筛细胞数量等手段,不断提高筛选过程中的筛选压力,从而提高筛选的效率,最后经过12轮筛选,获得了饱和富集筛选文库。通过对筛选文库克隆测序和同源性分析,获得了4条能够同时结合PC-3M-1E8和PC-3M-2B4两细胞株的核酸适配体。2.人前列腺癌细胞株核酸适配体的性质考察及初步应用研究随后对所获得的核酸适配体进行了性质分析研究,通过流式细胞术考察了细胞特异性、平衡解离常数、温度稳定性等。实验结果表明,核酸适配体具有特异性强、亲和力高、温度稳定性好等特点。另外,还运用Mfold软件分析了核酸适配体的二级结构,根据二级结构的分析结果进行序列结构的优化,得到一条仅有51 nt的优化后序列C1,其平衡解离常数约为10 n M;以及经蛋白酶处理后,根据核酸适配体与细胞的结合情况,初步推测细胞表面的靶分子很可能是一种膜蛋白,为后续前列腺癌细胞表面的特异性肿瘤标记物的研究与钓取奠定了实验基础,并有望应用到前列腺癌的早期诊断治疗中。