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目的:揭示健脾益气方调控PI3K/Akt/mTOR信号通路,干预间皮细胞间充质转分化进程进而防治PD相关性腹膜纤维化的分子机制。从分子水平上探索腹膜纤维化“脾气亏虚”的生物学本质及与腹膜间皮细胞转分化的密切联系。方法:75只SD雄性大鼠,体重范围在160g-200g,随机分成5组,每组15只,尿毒症大鼠模型建立一周后,除假手术组外,即刻进行腹膜透析,并联合LPS高糖诱导法腹腔注射。(1)健脾益气方组(高剂量中药组和低剂量中药组):予健脾益气方颗粒冲水进行灌胃,晨间灌胃。(2)阿托伐他汀组:将该片剂研磨成粉,以有效剂量1.8mg/(kg·d)于腹膜透析开始之日,晨间灌胃。(3)模型组:于大鼠腹膜透析当日开始,予等体积蒸馏水,每天晨间灌胃一次。(4)假手术组:未做过5/6肾切除的大鼠,正常饲喂,不做任何干预。通过尾静脉抽血检测确定尿毒症大鼠模型建立成功,然后每日腹腔注射4.25%腹透液行腹透相关性腹膜纤维化造模,30天后,取每组大鼠的腹膜壁层组织,规格为1cm×1cm大小,通过HE染色观察腹膜厚度以及腹膜纤维化程度,电镜下观察腹膜间皮细胞形态变化,以及免疫荧光和Western blot法测定PI3K、pAKT、pmTOR、α-SMA、E-Cadherin蛋白的表达。结果:(1)病理:a.光镜在光镜下对经HE染色后的腹膜组织切片进行观察,假手术组由正常的扁平腹膜细胞所包被,呈连续分布的间皮细胞结构完整,且有较稀疏的结缔组织依附于腹膜间皮下面,结缔组织也未见增生。模型组与阿托伐他汀组、健脾益气方低剂量、高剂量组的腹膜组织与假手术对照组相比增厚明显,且质地疏松,并伴有间皮细胞的脱落。模型组的间皮细胞与纤维化组织界限模糊,在间皮下有大量纤维蛋白沉积,且比西药和中药干预组的腹膜组织更为明显。b.电镜其中假手术组的腹膜间皮细胞没有发生变形,且结构完整;胞内的细胞器等物质清晰可见;间皮细胞之间的连接较为紧密。与假手术组相比较模型组腹膜间皮细胞数量减少,多数已经脱落、变形,原有的结构被破坏,并发生纤维组织增生。西药组图中细胞结构较模型组完整,间皮细胞间的基质有一定积聚,细胞器等胞内组织结构清晰可见。中药低剂量组镜下观察其间皮细胞有脱落,部分与胞外基质融合,细胞绒毛偶见,胞内器官分界不明显。中药高剂量组腹膜纤维化程度明显轻微,细胞间联系较为紧密,基质增生不明显,胞内线粒体、内质网等细胞器分布较为明显,胞外纤维蛋白沉积较少。(2)免疫组织化学法:a.α-SMA、E-Cadherin的表达其中假手术组中α-SMA表达正常,而E-Cadherin呈高表达状态;模型组中α-SMA呈高表达状态,E-Cadherin的表达较低(P<0.05)。阿托伐他汀西药组、中药低剂量组、中药高剂量组中α-SMA表达均较模型组的表达降低,与之相反E-Cadherin的表达均较模型组的增加(P<0.05)。中药高剂量组α-SMA表达较中药低剂量组和西药组均降低(P<0.05);中药高剂量组E-Cadherin的表达较中药低剂量组和西药组均增加(P<0.05)。b.PI3K、pAKT、pmTOR的表达其中假手术组中PI3K、pAKT、pmTOR表达较低;模型组中PI3K、pAKT、pmTOR的表达则明显增强(P<0.05)。阿托伐他汀西药组、中药低剂量组、中药高剂量组中PI3K、pAKT、pmTOR的表达较模型组明显减弱(P<0.05)。中药高剂量组PI3K、pAKT、pmTOR表达较中药低剂量组和西药组均降低(P<0.05).(3)免疫印迹法:模型组中的pAKT和pmTOR表达明显高于假手术组;而阿托伐他汀组、中药高剂量组和中药低剂量组中的pAKT和pmTOR表达较模型组明显减少;其中pAKT和pmTOR中的中药高剂量组的表达较西药组和中药低剂量组明显降低(P<0.05)。结论:(1)经实验证实,激活并上调介导腹膜间皮细胞损伤的PI3K/Akt/mTOR信号通路是参与间皮细胞EMT以及腹膜纤维化的主要机制之一。(2)健脾益气汤能够上调E-cadherin表达,抑制α-SMA以及PI3K/Akt/mTOR信号通路的表达,进而抑制腹膜间皮细胞EMT进程,并且能够减轻腹膜增厚程度、改善腹膜功能,最终起到拮抗腹膜纤维化作用。