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人腺病毒(Human adenovirus,HAd V)是引起急性感染性疾病的常见病毒,其中HAd V-3和HAd V-7是引起重症肺炎的主要型别。目前临床实验室缺乏对HAd V进行分型的可靠和实用的方法,因此建立简便、快速、准确的HAd V分子分型方法对于临床诊断和流行病学调查非常有意义。本研究建立并评价了两种含内参的双重实时荧光重组酶介导的等温扩增技术(Recombinase-aided amplification,RAA)检测HAd V-3和HAd V-7的方法;并通过对免提核酸的条件摸索和优化,建立一种免提取核酸的实时荧光RAA检测HAd V-3的方法;进一步将高温快速裂解核酸技术、RAA技术和侧流层析试纸条技术(Lateral flow dipstick,LFD)相结合,建立了一种针对HAd V-7的免提取核酸LFD-RAA检测方法。具体内容如下:本文在第2章部分,分别建立并评价了两种含内参的双重实时荧光RAA检测HAd V-3和HAd V-7的方法。两种方法分别是在39°C条件下,单管反应20分钟。通过Probit回归分析验证,HAd V-3和HAd V-7的双重实时荧光RAA检测方法的灵敏度分别为5.0拷贝/反应和14.8拷贝/反应;与其他型别的HAd V和其他常见呼吸道病毒的无交叉反应;采用双重实时荧光RAA方法检测152例HAd V阳性临床样本,结果与已公开发表的三重实时荧光定量PCR(Triplex quantitative real time PCR,tq-PCR)方法结果完全一致。本部分研究首次报道了采用加入内参的双重实时荧光RAA法检测HAd V-3和HAd V-7,内参的加入有效地降低了假阴性率。本文在第3章部分,通过对核酸免提取条件进行摸索和优化,采用高温快速裂解核酸,建立一种HAd V-3免提取核酸的实时荧光RAA检测方法;使用该方法对培养的10倍系列稀释的HAd V-3毒株进行检测,结果和tq-PCR方法相比灵敏度相当,对应的最低浓度稀释样本的CT值为36.87。对常见的其他型别呼吸道病毒进行检测无交叉反应。两种方法对72例HAd V阳性临床样本进行平行检测,结果完全一致。本部分首次将免提取核酸方法应用于实时荧光RAA方法以检测HAd V-3,简化了核酸提取的步骤。本文第4章进一步把高温快速裂解核酸、RAA技术和LFD技术相结合,建立了一种针对HAd V-7的免提取核酸LFD-RAA检测方法。该过程无需提取核酸,无需特殊检测仪器,整个过程仅需要40分钟即可完成对临床样本的检测。对培养的10倍系列稀释的HAd V-7毒株进行检测,结果和tq-PCR方法相比灵敏度稍低,Ct值大于31.33的毒株难以判读,对常见其他型别的呼吸道病毒无交叉反应。两种方法对72例HAd V阳性临床样本平行检测,Kappa值为0.83,结果具有较高程度的一致性。本部分首次将免提取核酸方法和LFD-RAA技术相结合以检测HAd V-7,极大的缩短了整个检测过程需要的时间。