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目的: 体外研究MAPK信号传导通路对氧化应激诱导滋养细胞侵袭力下降的介导作用。 方法: ①建立滋养细胞氧化应激模型：选用人早孕绒毛外滋养细胞系HTR-8/SVneo，以不同浓度H2O2孵育HTR-8/SVneo细胞12h，应用CCK-8法检测细胞增殖情况，荧光探针DCFH-DA标记法检测细胞内ROS水平。然后采用下述方法验证该模型：选择合适浓度H2O2孵育细胞，Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术分析细胞早期凋亡水平，TBA法和NBT法分别检测HTR-8/SVneo细胞匀浆中MDA浓度和SOD活性。②检测氧化应激条件下滋养细胞侵袭力变化：H2O2孵育HTR-8/SVneo细胞24h，Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭力；H2O2孵育细胞6h和12h，荧光定量PCR检测细胞内MMP-2/9mRNA水平，Western Blot检测细胞内MMP-2/9蛋白水平，明胶酶谱实验检测细胞培养上清中MMP-2/9酶活性。③确定ERK、JNK和p38磷酸化特异性抑制剂实验浓度：H2O2孵育HTR-8/SVneo细胞6h和12h，Western Blot检测细胞内ERK、JNK和p38磷酸化水平；分别用ERK、JNK和p38磷酸化特异性抑制剂孵育HTR-8/SVneo细胞1h，H2O2孵育细胞12h检测细胞内ERK、JNK和p38磷酸化水平。④分析MAPK信号通路对氧化应激诱导滋养细胞侵袭力下降的介导作用：分别用ERK、JNK和p38磷酸化特异性抑制剂孵育HTR-8/SVneo细胞1h，H2O2孵育细胞24h检测细胞侵袭力变化，H2O2孵育细胞12h检测细胞内MMP-2/9mRNA和蛋白水平变化以及细胞培养上清中MMP-2/9酶活性变化。 结果: 1、造模：CCK-8实验中，与对照组比较，模型组H2O2浓度分别为25μM、50μM、75μM、100μM时，细胞活力均无明显变化（均p＞0.05）。荧光探针DCFH-DA标记法发现，与对照组比较，H2O2浓度分别为25μM、50μM、75μM时，细胞内ROS水平均无明显变化（均p＞0.05），H2O2浓度分别为100μM、250μM、500μM、1000μM时，细胞内ROS水平均上升（均p＜0.05）。因此，H2O2浓度为75μM~100μM时均可在不影响细胞增殖的情况下诱导细胞氧化应激。本实验选用100μMH2O2进行造模，与对照组比较，模型组细胞凋亡水平差异无统计学意义（p＞0.05），细胞匀浆MDA浓度和SOD活性均增加（p＜0.05），提示造模成功。 2、氧化应激条件下滋养细胞侵袭力变化：与对照组比较，模型组滋养细胞侵袭力、细胞内MMP-2/9mRNA及蛋白水平均下降（均p<0.05），培养上清中MMP-2/9酶活性下降（p<0.05），提示，模型组滋养细胞侵袭力下降。 3、ERK、JNK和p38磷酸化特异性抑制剂浓度：与对照组比较，模型组ERK、JNK和p38磷酸化水平均升高（均p<0.05）；而加入ERK、JNK、p38磷酸化抑制剂（浓度分别为50μM、50μM、40μM），模型组ERK、JNK和p38磷酸化水平均降低（均p<0.05）。 4、MAPK信号通路对氧化应激诱导滋养细胞侵袭力下降的介导作用：JNK或p38磷酸化抑制剂可上调模型组细胞侵袭力（p<0.05）、细胞内MMP-2/9 mRNA及蛋白水平、培养上清中MMP-2/9酶活性（p<0.05）；ERK磷酸化抑制剂下调模型组细胞侵袭力、细胞内MMP-2mRNA及蛋白水平、培养上清中MMP-2/9酶活性（均p<0.05）。 结论: 氧化应激可体外诱导滋养细胞侵袭力下降。MAPK信号传导通路中的ERK通路、JNK通路及p38通路对其均具有介导作用，其中，JNK和p38通路对滋养细胞侵袭力具有抑制作用，ERK通路对滋养细胞侵袭力具有促进作用，其综合作用表现为抑制作用。