猪沙门氏菌耐药基因检测方法的建立及其应用

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沙门氏菌是一种重要的人畜共患病的病原菌,其分布广,危害大,动物沙门氏菌是世界各地人类食物中毒的主要致病菌。由于临床上抗生素的不合理使用及一些饲料抗生素添加剂的使用,使沙门氏菌逐渐产生了耐药性,耐药性的形成对临床治疗来说是一个很棘手的问题。一旦产生耐药性,原本一些有效的药物便不能达到治疗的效果,从而使病情加重甚至危及生命,由于细菌有多种产生耐药的机制,且耐药性可以传播并且传播速度很快,这种耐药性可以通过残留在畜产品中的药物经过食物链而传染给人,这严重影响着我国畜牧业的发展,同时也影响着人类的身体健康。因此,预防和控制耐药性的产生和传播有着非同一般的意义,如果能及早地检测出耐药性,进行细菌耐药的分子检测无疑是一种快捷、简便的方法。本试验针对沙门氏菌及沙门氏菌的耐药性进行了以下工作: 1、从临床沙门氏菌病发病猪中分离了41株沙门氏菌。 2、对临床分离株进行药敏试验,确定了规模化猪场致病性沙门氏菌的耐药情况。 3、参照GenBank上已经发布的抗性基因序列,设计了48对引物,扩增出了五类抗菌药物的11种抗性基因(OXA-1,aadA1,aadA2,aadB,aph(3′)-Ⅱ,aacC2,cat1,tetB,dhfrⅫ,dhfrⅩⅢ,dhfrⅦ),初步阐明了该五种抗生素抗性基因的分子流行病学规律。 4、建立了检测四环素、氯霉素、氨基糖甙类与甲氧胺嘧啶的PCR检测方法,包括tet(B)、cat1、aacC2、aadA2、dhfrⅫ、dhfrⅩⅢ的PCR检测,PCR阳性检测率与药敏试验有较高的符合率,为从分子水平上监测沙门氏菌的耐药性奠定了基础。
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