【摘 要】
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目的:探讨ATPAF1对哺乳动物（小鼠）心肌线粒体ATP合酶的组装和功能的影响及作用机制。方法:利用CRISPR/Cas9技术成功构建ATPAF1基因敲除小鼠模型,通过F1代小鼠自交获得F2代纯合子小鼠品系,并且记录小鼠体重等生长情况。小动物超声仪检测不同周龄小鼠心功能变化;HE染色、Masson染色、WGA染色等组织学检查观察心肌肥厚和纤维化等改变以及TUNEL染色检测心肌细胞凋亡;免疫印迹和蓝
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目的:探讨ATPAF1对哺乳动物（小鼠）心肌线粒体ATP合酶的组装和功能的影响及作用机制。方法:利用CRISPR/Cas9技术成功构建ATPAF1基因敲除小鼠模型,通过F1代小鼠自交获得F2代纯合子小鼠品系,并且记录小鼠体重等生长情况。小动物超声仪检测不同周龄小鼠心功能变化;HE染色、Masson染色、WGA染色等组织学检查观察心肌肥厚和纤维化等改变以及TUNEL染色检测心肌细胞凋亡;免疫印迹和蓝绿色温和凝胶电泳检测线粒体ATP合酶表达量;透射电子显微镜观察小鼠心肌细胞线粒体超微结构的变化;In-gel和线粒体水解实验检测心肌线粒体活性是否改变;最后采用OROBOROS Oxygraph-2k高分辨率呼吸测定仪检测线粒体氧化呼吸链的氧化呼吸活性是否发生改变,以及检测敲除小鼠心肌线粒体ROS的生成是否增加。结果:1.ATPAF1基因敲除小鼠体重较对照组减低;2.ATPAF1基因敲除导致纯合子小鼠心功能减弱,心室重塑;3.经验证,ATPAF1在ATP合酶生物合成中与β亚基相互作用;4.ATPAF1蛋白的缺失引起ATP合酶的二聚化及含量较少,由此引起ATP合酶水解活性减弱和线粒体结构异常;5.ATPAF1的缺失致使线粒体氧化呼吸能力减弱。结论:ATPAF1通过影响ATP合酶的组装和线粒体氧化呼吸能力从而导致小鼠心功能障碍,因此ATPAF1对于哺乳动物（小鼠）心脏结构和功能的维持必不可少。
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