玉米盐诱导蛋白激酶基因ZmPti1、ZmSPK1和ZmASK1的克隆及功能分析

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蛋白激酶在植物的抗盐途径中起到了非常重要的作用。我们以拟南芥和水稻的数据库中参与盐胁迫信号的蛋白激酶基因序列为信息探针,通过同源克隆的方法,从玉米中克隆了3个受盐胁迫诱导的蛋白激酶基因,对这3个蛋白激酶的序列进行了分析,并对其在抗盐途径中的作用做了研究。 通过RT-PCR的方法从玉米中克隆到一个受高盐诱导的全长cDNA,其编码一个与Ptil同源的蛋白,命名为ZmPtil。在酵母中表达ZmPtil蛋白,蛋白经过ProBond Resin进行纯化,并对纯化的蛋白进行自我磷酸化活性分析。磷酸化分析试验表明ZmPtil蛋白具有磷酸化活性。半定量RT-PCR分析结果显示ZmPtil基因的表达可以被水杨酸(SA)、低温、甘露醇和盐所诱导,但是不被脱落酸(ABA)所诱导。另外,在玉米不同的组织器官中ZmPtil基因的表达模式也不同。这些结果表明ZmPtil编码了一个新的Ptil-like激酶,并且可能同时参与了生物逆境和非生物逆境的信号传导过程,同时也很有可能参与了植物发育过程的调控。 为了进一步验证ZmPtil的生物学功能,我们在拟南芥中过量表达了ZmPtil基因。随后的分析结果表明,与对照相比,转基因株系的抗病性和抗冷、抗旱性没有明显的提高,但是抗盐性得到了明显的提高。在高盐胁迫下转基因植株的生长状态得到了改善;相对生物量、经济产量都得到了提高。生理生化分析表明,在盐胁迫下转基因株系相对于对照的SOD活性明显提高;MDA含量和外渗电导率则显著降低。 同样通过RT-PCR的方法,一个被高盐诱导的全长的cDNA被克隆,命名为ZmSPK1(for stress-induced protein kinase)。序列分析表明,此cDNA编码一个与SnRK2b同源的蛋白。生物信息学分析表明ZmSPK1蛋白含有364个氨基酸,估计分子量为41.8KD,等电点为5.8。进化树分析表明,推测的蛋白质序列与SnRK2b组蛋白成员序列的一致性最高。在酵母中表达ZmSPK1蛋白,表达的蛋白经过ProBond Resin纯化后用来做磷酸化活性分析,磷酸化分析结果表明ZmSPK1具有激酶活性。半定量RT-PCR分析表明ZmSPK1的表达可以被甘露醇、盐和ABA所诱导。另外,在玉米不同组织器官中,ZmSPK1显示不同的表达模式,在生殖器官中表达量最高。这些结果表明,ZmSPK1可以编码一个有功能的蛋白激酶,可能在非生物胁迫中起到一定作用,同时也可能参与了植物的生殖发育过程的调节。
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