目的:支气管哮喘是一种发病率高，严重危害人们身体健康的慢性疾病，其发病的中心环节为气道炎症的形成，多种细胞因子相互作用并形成网络在慢性炎症的发生、发展中起到重要作用，糖皮质激素(glucocorticoid，GC)是治疗哮喘的主要药物，具有明显的抗炎作用，但是，有部分患者对激素治疗反应不佳，出现激素低敏感(steroidinsensitive，SI)现象。众所周知，GC的作用由糖皮质激素受体(GR)所介导，GR属于类固醇激素受体超家族。GR有两种亚型分别称为GRa和GRβ，是由编码GR的基因在第九外显子处选择性剪接不同所致，其可造成GRa和GRβ在竣基端727位氨基酸以后的氨基酸序列不同。GC的主要生理功能由GRa介导，GC与GRa结合后，经过核转位，结合在相应的激素反应元件上从而调节有关基因的转录。GRβ的功能目前还不十分清楚，有文献报道GRβ可作为内源性的抑制因子来减弱GRa介导的GC发挥作用。在SI哮喘中GRβ可能有异常表达。支气管哮喘患者外周血中的T淋巴细胞和巨噬细胞活化后释放高水平的IL-2、IL-4、IL-13及TNF-a等细胞因子，这些细胞因子相互构成复杂的紊乱网络，使气道反应性增加，气道平滑肌收缩，黏液分泌增多，血管通透性增加。GRβ过度表达导致炎症细胞对激素抗炎作用的敏感性下降，引起大量外周血中的炎症细胞浸润并聚集于气道，同时释放更多的细胞因子形成恶性循环。在这种情况下常规剂量的糖皮质激素不能取得较好的疗效，导致SI现象。SI哮喘是一个具有挑战性的临床问题，其与患者的预后和疾病的转归密切相关。因此本研究目的在于探讨SI哮喘患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)中糖皮质激素受体p(Glucocorticoid receptor beta，GRβ)的表达和血清中细胞因子白介素-4(interleukin-4，IL-4)、白介素-13(interleukin-13，IL-13)的水平及其在SI哮喘发病中的作用。 方法:本研究按照2003年中华医学会呼吸病学分会哮喘组制定的哮喘防治指南，收集23例哮喘病人为实验组，分两组:激素敏感组(steroid sensitive SS组，16例，男10例，女6例，平均年龄43.3±10.4岁)和激素低敏感组(SI组，9例，男4例，女5例，平均年龄48.0±15.4岁)；10例健康者为对照组(10例，男6例，女4例，平均年龄36.8岁)。采集受试者外周静脉血，分离出单个核细胞PBMCs，分A、B、C三组，根据细胞计数，①A1组细胞(1×106/m1)，从PBMC中提取总RNA逆转录得到cDNA，然后用特异性GRβ引物通过PCR扩增得到目的片段，通过半定量分析测定GRβmRNA的相对表达量；A2组细胞(5x107/m1)涂片，应用免疫荧光技术检测受试者PBMCs中GRβ的表达，根据荧光强度进行分析；②B组细胞(1×106/ml)，于37℃，5％CO2体外培养48小时后，重复上述操作，B1组采用.RT-PCR检测，B2组行免疫荧光测定，观察PBMCs中GRβ的表达；③C组细胞(1×106/m1)加入受试者的10％的血清刺激，培养24小时，Cl组和C2组细胞同上，分别采用RT-PCR和免疫荧光方法检测受试者PBMCs中GRβ的表达。另外，应用液态芯片技术检测受试者外周血清中IL-4和IL-13的表达水平，以探讨其与GRβ表达的相关性和在SI哮喘发病中的的作用。 结果:通过RT-PCR检测结果，SI哮喘组与SS哮喘组GRβmRNA的表达水平差异有显著性(P<0.05)，SI哮喘组与健康对照组GRβmRNA的表达水平差异有显著性(P<0.05)，而体外培养PBMC4.8小时后，三组GRβmRNA的表达水平差异无显著性(P>0.05)，GRβ下降到正常水平；但是加入血清刺激PBMC培养24小时，SI哮喘组与健康对照组GRβmRNA的表达水平差异有显著性(P<0.05)，可能与血清中的某些炎性细胞因子刺激有关。同样，我们应用免疫荧光技术检测了PBMC中GRβ的表达，出现上述同样的结果。通过应用液态芯片技术，研究发现哮喘组与健康对照组相比，外周血IL-13、IL-4表达水平增加，差异有显著性(P<0.05)，而IL-4在SI哮喘组中有高表达，高于SS哮喘组，差异有统计学意义(P<0.05)，IL-13的表达在SI哮喘组与SSn孝喘组差异无统计学意义(P>0.05)。 结论:1.SI哮喘患者外周血单个核细胞GRβmRNA异常高表达；2.PBMC体外培养48小时，SI哮喘患者的GRβmRNA的表达降低到正常水平，可能SI哮喘对激素敏感性呈可逆改变；3.PBMC加血清刺激培养后， GRβmRNA呈持续高表达；4.哮喘患者外周血细胞因子IL-4、IL-13的表达水平增加，而IL-4在SI哮喘患者表达显著高于SSn孝喘患者，可能与炎性细胞因子诱导SI哮喘患者外周血PBMC中GRβmRNA过量表达有关。