论文部分内容阅读
胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin, TSLP)是一种与白细胞介素-7(IL-7)类似的细胞因子,与过敏炎症具有密切的联系,它可以在胸腺、肺、皮肤、肺、扁桃体等多种类型的上皮细胞中、基质细胞和肥大细胞中大量表达,能强烈的刺激骨髓来源的树突状细胞介导的 Th2型炎症反应。研究发现TSLP在Th2细胞介导的过敏性炎症中扮演着重要的角色,炎症又在癌症发展的各个阶段起着重要作用。在人体试验中证实,hTSLP单克隆抗体对过敏性哮喘的具有一定的治疗作用。随着研究的深入,逐步阐明TSLP与过敏性疾病及肿瘤之间的关系,利用TSLP作为诊断依据和治疗相关性疾病将成为可能,所以hTSLP单克隆抗体的制备具有重要的意义。 本研究通过基因工程技术将 hTSLP基因成功构建到大肠杆菌原核表达系统中,获得BL21-PET30a-Q1和BL21-PET22b-Q1两株工程菌,并且用IPTG诱导表达重组蛋白。通过SDS-PAGE检测显示目的条带在15KD附近,与预期结果一致。工程菌通过IPTG诱导表达及Ni2+柱分离纯化hTSLP蛋白,经SDS-PAGE检测和Gel-Proanalyzer软件分析表明:BL21-PET30a-Q1经30℃,0.4 mM/L IPTG诱导4 h诱导后得到 hTSLP蛋白,表达量约为14.9%;BL21-PET22b-Q1经37℃,0.4 mM/L IPTG诱导4 h后得到 hTSLP蛋白,表达量约为9.09%。经纯化后 hTSLP蛋白的纯度达到90%以上。通过对 hTSLP蛋白复性研究,确定了稀释 hTSLP蛋白和梯度透析连用法为最佳方法,该方法可以使蛋白损失率降至2.32%,并且使用 ELISA检测测得该方法活性最高,利用获得蛋白对小鼠免疫,成功制备了8株杂交瘤细胞。