相对于农药残留确证分析的色谱法,农药残留快速检测方法因具有快速、简易等优点,在发展中国家的食品安全保障中应用广泛。其中以酶抑制法为原理的试纸条检测方法已作为我国的国家标准(GB/T 5009.199)。然而现有的试纸条存在需要温度控制、依赖人工操作使折叠酶片与底物片反应、反应不充分等严重缺陷,直接导致实际检测中的样品量小、操作繁琐、结果误判等,限制了该方法的推广应用。本论文在已获得高灵敏度、高稳定性重组黑腹果蝇乙酰胆碱酯酶的基础上,模拟侧向流动检测原理,寻找合适的底物和可见颜色变化,设计一种新型的农药残留快速检测试纸条;进而对酶和底物的固定基质、酶的固定化条件、酶和底物的最适浓度、酶与样品反应时间、显色反应时间等进行了大量优化。最后对其检出限、检测时间、稳定性等关键指标进行了分析评价。实验结果表明,本速测卡中的生化反应在液态的环境下进行,使反应更为充分;无色底物吲哚酚乙酸酯的水解产物吲哚酚自氧化产生蓝色的靛蓝,适合作为肉眼观察检测结果的显色剂;阳性样品呈无色,而阴性样品呈蓝色。当固定酶量为3 U、明胶浓度为0.6%时,底物量为4 mg时,效果较好。3μg/L敌敌畏、50μg/L丁硫克百威、10μg/L敌百虫、0.4 mg/L氧化乐果可有效抑制酶活。该速测卡对敌敌畏、丁硫克百威、敌百虫、甲萘威的检测灵敏度优于现有的天河绿洲试纸条。此外,在4℃下保存30周后仍然有效。因此,本论文研制出的农药残留速测卡,使用更方便,检测灵敏度更高,满足现有国家标准的限量要求,在实际中具有较大的应用潜力。