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犬乳腺肿瘤是母犬最常见的肿瘤之一,犬作为伴侣动物,在生活环境等方面与人类也有很多相似之处,故犬自发性乳腺肿瘤是人乳腺肿瘤的良好模型。SOX2在多种肿瘤中有较高表达,是肿瘤的研究热点,但其在肿瘤发生发展中的机制尚未完全明确。故本试验以分别从犬乳腺肿瘤原发灶和转移灶中分离培养的CHMp和CHMm细胞系为研究对象,探究SOX2对犬乳腺肿瘤不同细胞系增殖和迁移的作用机制。本试验将SOX2基因的siRNA以脂质体作为转染试剂转染进犬乳腺肿瘤细胞CHMp和CHMm中,并检验SOX2的敲低效果。通过CCK-8和克隆形成试验检测各组细胞系的增殖率。划痕愈合试验和Transwell小室迁移试验来检测敲低SOX2后犬乳腺肿瘤细胞系CHMp、CHMm的迁移能力。Western blot检测相关蛋白表达的变化。测定他莫昔芬和顺铂对各组细胞的IC50,检测SOX2敲低后犬乳腺肿瘤细胞对他莫昔芬和顺铂的敏感性变化。试验结果:1、为检测转染后细胞SOX2的敲低效果,对各组细胞提取蛋白进行SOX2蛋白表达量的检测,转染3种针对SOX2基因不同位点的siRNA对SOX2的表达进行干扰后,SOX2在蛋白水平的表达量下降,与对照组相比差异极显著（P<0.001）。2、CCK-8和克隆形成试验检测细胞增殖能力,与对照组相比,SOX2敲低的CHMp、CHMm细胞的增殖率和克隆形成率均显著下降（P<0.001）。3、划痕愈合试验和Transwell小室迁移试验检测细胞迁移能力,SOX2敲低的CHMp、CHMm细胞划痕愈合率和穿过Transwell小室的细胞数量均显著降低（P<0.001）。4、SOX2敲低可以抑制Wnt/β-catenin信号通路,SOX2敲低的CHMp、CHMm细胞与对照组细胞相比β-catenin蛋白表达量明显降低,显著性差异（P<0.001）。5、SOX2可以抑制Hippo信号通路,SOX2敲低的CHMp、CHMm细胞与对照组细胞相比NF2蛋白表达量明显升高,YAP蛋白表达量明显降低,显著性差异（P<0.001）。6、SOX2敲低的CHMp、CHMm细胞EMT标志性蛋白E-cadherin表达量明显升高,N-cadherin、Vimentin表达量均明显降低（P<0.001）。7、敲低SOX2后4羟-他莫昔芬和顺铂对犬乳腺肿瘤细胞IC50显著降低（P<0.05）,犬乳腺肿瘤对4羟-他莫昔芬和顺铂的敏感性升高。综上所述,本试验成功构建了SOX2敲低的犬乳腺肿瘤细胞模型,敲低SOX2可通过抑制Hippo信号通路降低犬乳腺肿瘤细胞增殖和迁移能力,提高犬乳腺肿瘤细胞对他莫昔芬和顺铂的敏感性,进一步完善了SOX2调控乳腺肿瘤的机制,为以SOX2为乳腺肿瘤治疗靶点提供参考。