【摘 要】
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草鱼(grass carp,Ctenopharynodon idellus)是我国广泛养殖的水产品种之一,其肉质鲜美、营养丰富、生长快速,深受消费者和养殖户的喜爱。饲料添加剂,对于保证水产动物的正常生长发育,提高饲料的利用率,促进水生动物的食欲,预防各类疾病,降低饲料中营养物质的损失以及改进水产品品质等均具有重要作用。低聚乳果糖能促进生长,提高生存率。而纳豆芽孢杆菌能产生消化酶,如蛋白酶、淀粉酶和
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草鱼(grass carp,Ctenopharynodon idellus)是我国广泛养殖的水产品种之一,其肉质鲜美、营养丰富、生长快速,深受消费者和养殖户的喜爱。饲料添加剂,对于保证水产动物的正常生长发育,提高饲料的利用率,促进水生动物的食欲,预防各类疾病,降低饲料中营养物质的损失以及改进水产品品质等均具有重要作用。低聚乳果糖能促进生长,提高生存率。而纳豆芽孢杆菌能产生消化酶,如蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶,促进饲料的消化吸收。本文以草鱼为研究对象,采用纳豆芽孢杆菌和低聚乳果糖添加到饲料中,探讨了这两种饲料添加剂对草鱼生长、代谢、抗氧化性、免疫系统以及基因表达的影响。所取得的结果如下:1.纳豆芽孢杆菌的培养及高密度菌剂饲料的制备对湖南农业大学微生物教研室保藏的3个纳豆芽孢杆菌菌株(A、B、C),进行了菌落形态和细胞形态的分析,测定了3个菌株的生长性能。采用发酵技术扩大培养了纳豆芽孢杆菌,并制备了饲料。结果证明,3个菌株(A、B、C)中,以干粉形式保藏的C菌株活性最佳。在培养14h后进入稳定期,活力最高。因此,后续试验所采用的饲料添加剂为培育14h后的纳豆芽孢杆菌。培育14h后的活菌数量为6.78×109CFU/ml,符合本试验需求。2.添加纳豆芽孢杆菌对草鱼生长性能的影响通过在饲料中分别添加0%、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%的纳豆芽孢杆菌,试图了解纳豆芽孢杆菌对草鱼生长以及各种血清指标的影响;并通过组织切片技术,分析了饲喂添加不同比例的纳豆芽孢杆菌的饲料对草鱼肠粘膜形态的影响。结果表明:在草鱼饲料中添加0.6%、0.8%和1.0%的纳豆芽孢杆菌后,增重率和特定生长率均显著增高。纳豆芽孢杆菌可促进草鱼蛋白的代谢,增加草鱼血清中总蛋白和尿素氮含量。但纳豆芽孢杆菌添加对脂肪代谢无明显影响。与对照组相比,添加0.4%、0.6%、0.8%和1.0%的纳豆芽孢杆菌可显著提高T-SOD的活性。添加纳豆芽孢杆菌对草鱼前肠和中肠的发育有促进作用,能改善肠道粘膜形态结构,增加绒毛长度,加深隐窝深度。3.添加纳豆芽孢杆菌对草鱼肌肉miRNA表达的影响在饲料中添加纳豆芽孢杆菌后检测肌肉发育相关基因和miRNA的表达变化。结果显示,0.8%和1.0%添加组miR-1a、miR-181a、miR-23a和miR-206表达上调,而肌细胞生长抑制素(myostatin)和肌细胞增强因子2C(myocyte enhancer factor2C,MEF2C)表达下调。因此,添加纳豆芽孢杆菌可提高草鱼生长,调节肌肉中与生长相关基因及miRNA的表达。4.添加低聚乳果糖对草鱼生长及肝脏转录组的影响本试验采用日粮中添加1.5%的低聚乳果糖(Ls)替代抗生素饲喂幼龄草鱼,研究其对草鱼基因转录情况的影响。草鱼的体增重率、特定生长率和饲料转化效率在饲喂添加1.5%的低聚乳果糖后,分别提高了14.2%、9.2%和10.1%。通过基因芯片技术从转录水平分析了饲喂低聚乳果糖的草鱼肝脏基因表达的变化。鉴定出416对表达差异显著基因,其中266个基因表达显著上升,150个基因表达显著下降。这些表达上升的基因大多与生长、免疫和糖代谢等有关,而表达下降的基因则是Ras致癌基因家族成员和v-myc病毒致癌基因同系物及细胞程序性死亡相关基因。上述试验结果对研究草鱼饲料添加剂提供了理论依据,为纳豆芽孢杆菌和低聚乳果糖的开发利用提供了初步的证据。
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