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间尼索地平（m-nisoldipine）[化学名称:1, 4-二氢-2, 6-二甲基-4-（3-硝基苯基）-3, 5-吡啶二羧酸甲酯异丁酯]是河北医科大学药学院自主研发的一种新的二氢吡啶类钙离子通道拮抗剂,主要适用于高血压和心绞痛等疾病的治疗。间尼索地平与尼索地平（nisoldipine）为同分异构体,药理活性相当,但光稳定性较优,经灌胃给药后研究大鼠的排泄实验表明,仅有少量原型药物经粪便和胆汁排泄,且尿中未检出,提示间尼索地平主要以代谢物的形式排出体外,原型药物排泄较少。因此,有必要对间尼索地平的代谢产物进行研究,为临床研究提供依据。本论文拟采用高效液相色谱质谱联用技术（HPLC-MS）,系统研究间尼索地平在大鼠体内外的代谢情况,共发现了14个间尼索地平的代谢产物,并确定其结构,按色谱保留时间的先后顺序将其命名为M1-M14,进而阐明间尼索地平在大鼠体内外的代谢途径及转化规律。采用肝微粒体体外孵育实验方法,确定细胞色素P450酶（CYP450）在间尼索地平主要代谢途径中的作用,为理解该药药物代谢机制,预测药物相互作用和药物多态性以及指导临床合理用药提供依据。第一部分间尼索地平的体外代谢研究目的:通过肝微粒体温孵、肠道菌厌氧培养等方法寻找间尼索地平的代谢物,并尽可能制备转化产物单体。方法:1.肝微粒温孵实验:根据文献报道的方法加以改进将间尼索地平加入肝微粒体温孵液中,温孵一定时间后,采用HPLC-MS分析技术,寻找代谢物,获取代谢物的质谱信息,推测及确认结构,根据代谢物结构推测间尼索地平在大鼠肝微粒体内的代谢途径。2.肠道菌培养:取大鼠粪便,利用肠道菌厌氧培养的方法,研究间尼索地平的代谢,制备转化产物单体,通过1H-NMR、ESI-MS2等波谱数据对其结构进行推测确认。结果:1.肝微粒体温孵实验:在大鼠肝微粒体中发现了间尼索地平的10个代谢物,并推断出间尼索地平在大鼠肝微粒体内可能的转化途径。2.肠内菌温孵实验:在温孵液中发现了间尼索地平及其2种代谢产物,并推断出可能的代谢途径。结论:肝微粒体温孵实验和肠内菌转化实验均可模拟间尼索地平的体内代谢,是研究药物代谢一种切实可行的方法。第二部分间尼索地平的体内代谢研究目的:分析间尼索地平在大鼠体内的代谢物,同时研究间尼索地平及其代谢物在大鼠体内的转化规律,进而阐明间尼索地平的代谢途径。方法:应用HPLC-MS/MS分析技术研究间尼索地平及已知代谢产物的质谱裂解规律及色谱保留时间,以此作为间尼索地平大鼠体内代谢物分析鉴定的依据;再将健康SD大鼠按体重空腹灌胃给予间尼索地平的CMC-Na溶液10mg/kg后收集大鼠的尿液、粪便、胆汁、血液、小肠、肝组织等生物样品,经液-液萃取分离纯化后,应用HPLC-MS/MS分析生物样品中间尼索地平的代谢物,获取代谢物的质谱信息,推测及确认结构,根据代谢物结构推测间尼索地平在大鼠体内的代谢途径。结果:利用HPLC-MS/MS分析技术在体内生物样品中均发现了间尼索地平的代谢产物。在尿液中检测到8个代谢产物,未检测到原型药物;在粪便中检测到5个代谢产物及原型药物;在胆汁中检测到8个代谢产物及原型药物;在血液中检测到9个代谢产物及原型药物;在小肠组织中检测到7个代谢产物及原型药物;在肝组织中检测到6个代谢产物及原型药物。综合间尼索地平在大鼠体内的代谢情况,共发现14种间尼索地平的代谢产物。结论:间尼索地平在大鼠体内发生广泛的生物转化,且该方法灵敏度高、专属性好、样品前处理简单、快速,适合于药物代谢分析。第三部分HPLC-MS/MS法研究大鼠肝微粒体中间尼索地平的代谢与CYP450酶的相关性目的:通过肝微粒体孵育实验研究间尼索地平的代谢转化过程,探讨参与间尼索地平主要代谢途径的CYP450亚型酶。为临床上合理用药提供科学依据。方法:在体外用大鼠肝微粒体研究间尼索地平的代谢,并采用CYP450各亚型酶的选择性抑制剂探讨大鼠肝微粒体中参与间尼索地平二氢吡啶环脱氢及二氢吡啶环3-羟基化代谢的CYP450酶。结果:间尼索地平在大鼠肝微粒体内的主要代谢产物有二氢吡啶环脱氢代谢产物（S1）,二氢吡啶环3-羟基化代谢产物（S2）,二氢吡啶环脱氢及3-羟基化代谢反应（S3）。CYP3A4的特异性抑制剂酮康唑能够竞争性抑制间尼索地平二氢吡啶环脱氢代谢反应;CYP2C19的特异性抑制剂盐酸噻氯匹定能够竞争性抑制二氢吡啶环3-羟基化代谢反应。其它CYP450各亚型酶的特异性抑制剂对间尼索地平的代谢反应无显著影响。结论:间尼索地平在大鼠肝微粒体内被迅速代谢。CYP3A4和CYP2C19在间尼索地平的代谢反应中起重要作用。