目的：研究铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制，同时利用重复序列聚合酶链反应（rep-PCR）进行分子流行病学调查。 方法：收集新华医院在2004 年7 月~ 2005 年8 月临床分离的耐亚胺培南和美罗培南铜绿假单胞菌共58 株，对碳青霉烯类抗生素耐药机制进行研究：1）在M-H 琼脂平板中加入针对不同酶及外排泵抑制剂，进行K-B 法药敏试验；2）用改良三相水解试验检测β-内酰胺酶； 3）用等电聚焦电泳进行酶的分析；4）用聚合酶链反应( PCR)检测金属酶基因（IMP、VIM）以及外膜膜孔蛋白基因（OprD2）；5）采用重复序列聚合酶链反应（rep-PCR）进行基因分型。 结果：58 株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌中，有52 株持续高产AmpC 酶合并主动外排系统的过度表达，其中15 株同时伴有外膜膜孔蛋白OprD2 缺失；1 株既持续高产AmpC 酶又有ESBLs 且合并过度表达主动外排；在5 株既不产β-内酰胺酶又无过度表达主动外排的细菌中，有1 株OprD2 基因缺失；58 株均未检测到金属酶。对58 株菌株进行重复序列聚合酶链反应（rep-PCR），经电泳后得到3-10 条条带，分成16 个基因型。从重症监护室（ICU）病人分离所得的菌株，主要为Ⅱ型和Ⅲ型，分别占71.79％(28/39)和17.95％（7/39），从急诊科、高干病区和呼吸科病人标本中分离所得的菌株，除有各自相对独立的基因型外，同时还有与ICU 菌株重叠的基因型存在。其余病区病人所分离的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌菌株数量较少，分布也较分散与独立。ICU 内可能同时存在多个基因型的流行。 结论：本院铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制是持续高产AmpC 酶合并主动外排系统的过度表达，其中约1/3 菌株又同时伴有外膜膜孔蛋白OprD2 缺失，未检出产生金属酶菌株。ICU存在多个型别的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的持续存在和流行，临床医护人员应对此高度重视，及时采取有效措施，控制耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的播散。