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1.苦草粉对草鱼幼鱼生长性能与生理生化性能的影响本研究评价了苦草粉(Vallisneria natans)在草鱼饲料中的应用效果。以不含苦草粉的基础饲料(VN0组)为对照,分别用10%(VN1组)、20%(VN2组)、30%(VN3组)的苦草粉替代基础组饲料中的次粉和米糠,配制出4种实验饲料,另设置一组只投喂新鲜苦草的青饲料组(VN组)。选用初始体重(18.85±0.20)g的草鱼幼鱼在室内水泥池网箱进行为期8周的养殖实验。结果表明,添加苦草粉不影响草鱼的存活率和饲料系数,30%苦草组增重率显著高于20%苦草组。随着苦草粉添加量的增加,内脏指数及肝胰脏指数显著降低;前肠淀粉酶活力显著增强,中、后肠淀粉酶活力显著降低;对照组前、中、后肠蛋白酶活力依次增强,随着苦草粉含量的增加,前肠蛋白酶活力显著增强,中肠蛋白酶活力表现出先增再降再增的变化,VN1组显著高于其他组,后肠蛋白酶活力呈现显著降低的趋势;肝胰脏SOD活力显著提高,MDA含量先降后升,VN3组最高。血清总蛋白含量有上升的趋势,VN3组显著高于其他组;血清白蛋白含量呈现先增后降的趋势,VN1组最高;血清ALT活力先增后降;与对照组相比血清AST活力显著降低,各苦草粉组之间没有显著性差异。添加苦草粉显著降低了饲料表观消化率,但在一定程度上增强了草鱼对嗜水气单胞菌的抗感染能力。VN组出现负增长现象,内脏指数及肝胰脏指数、血清白蛋白、球蛋白及ALT都显著低于其他组;肠道各段淀粉酶活力显著高于各实用饲料组;中肠蛋白酶活力显著高于对照组,后肠蛋白酶活力显著低于对照组。以上结果表明,饲料中添加10%~30%苦草粉对草鱼生长没有影响,但且有利于鱼体健康,可以作为草鱼饲料原料进行资源化的利用;苦草粉的使用效果明显优于新鲜苦草。2.苦草粉对草鱼幼鱼肌肉营养成分、胶原蛋白含量及胶原蛋白基因表达量的影响为了探究苦草对草鱼幼鱼肌肉营养成分、胶原蛋白含量及胶原蛋白基因的表达的影响,以不含苦草粉的基础饲料(VN0组)为对照,分别用10%(VN1组)、20%(VN2组)、30%(VN3组)的苦草粉替代基础组饲料中的次粉和米糠,配制出4种实验饲料,另设置一组只投喂新鲜苦草的青饲料组(VN组)。选用初始体重(18.85±0.20)g的草鱼幼鱼在室内水泥池网箱进行为期8周的养殖实验。结果显示:随着苦草粉添加量的增加,草鱼肌肉粗蛋白含量显著提高,粗脂肪和肌肉胶原蛋白含量都显著降低;肌肉各种脂肪酸含量也是显著降低的,而n-3/n-6显著提高;肌肉氨基酸总量上显著提高,苦草粉组鲜味氨基酸含量要显著高于对照组;2种胶原蛋白基因的相对表达量都有下降的趋势。新鲜苦草组在肌肉粗脂肪含量上显著低于其他各组,胶原蛋白含量显著高于其他组,而胶原蛋白基因的表达量要显著低于其他组,n3/n6却显著高于其他各组,氨基酸的含量要显著低于其他组。以上结果表明,饲料中添加30%以内的苦草粉可以提高肌肉的品质和营养价值,同时苦草添加组草鱼肌肉可能更符合人体健康需求;30%添加量苦草粉的使用效果是最好的。3.苦草对草鱼幼鱼肠道菌群的影响本研究是在第一章和第二章的研究基础上对实验鱼进行的更深入的研究,为了探究沉水植物苦草对草鱼肠道菌群的影响,本研究分别取基础饲料组(VN0)、30%苦草粉添加组(VN3)、新鲜苦草组(VN)草鱼幼鱼肠道内容物样本进行16S rRNA基因测序。结果显示:草鱼肠道优势菌门主要为厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria);VN3组群落多样性和群落丰度都显著高于其他组,VN组显著低于其他组(P<0.05);在门水平上,VN3组厚壁菌门、芽单胞菌门(Gemmatimonadetes)的相对丰度显著高于VN0组(P<0.05);VN组厚壁菌门的相对丰度也显著高于VN0组(P<0.05);在属水平上,VN3在微小杆菌属(Exiguobacterium)和芽孢杆菌属(Bacillus)的相对丰度显著高于VN0组(P<0.05);VN组在链球菌属(Streptococcus)、丹毒梭菌属(Erysipelatoclostridium)的相对丰度显著高于VN0组(P<0.05);VN在微小杆菌属(Exiguobacterium)和丹毒梭菌属(Erysipelatoclostridium)属相对丰度都显著高于VN3组(P<0.05)。结果表明:不同的饲料可以影响草鱼肠道菌群结构;添加30%苦草粉可以提高草鱼肠道内容物菌群多样性及丰度,促进肠道分解利用纤维素的能力,有利于鱼体健康;只投喂新鲜苦草降低了肠道菌群多样性和丰度,不利于草鱼肠道健康。4.苦草对草鱼幼鱼肠道代谢组学的研究本研究是利用GC/MS非靶向代谢组学技术对第一章所诉的VN0,VN3,VN组草鱼中肠前段代谢组学进行更深入的探讨,并对所得结果进行两两分组比较。结果显示,VN0、VN3两组共有差异代谢物114种,其中氨基酸有21种,糖类有8种,核苷类有7种;VN0、VN3组共有差异代谢物88种,其中氨基酸14种,核苷类有11种,糖类有10种,脂肪酸有4种;VN3、VN组共有差异代谢物58种,含量最多的差异代谢物分别有核苷类7种,糖类4种,脂肪酸4种,有机酸3种,能量代谢产物3种。此外,通过KEGG pathway mapper功能分析对差异代谢通路进行展示,苦草对草鱼代谢通路也有显著影响,VN0、VN3组共有15个具有显著性差异的通路图,主要包含氨酰生物合成,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,嘌呤代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解,色氨酸代谢等通路。VN0、VN组有12个具有显著性差异的通路图,主要包括氨酰生物合成,氨酰生物合成,缬氨酸,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,亮氨酸和异亮氨酸,丙酸的代谢,苯丙氨酸的代谢等代谢通路。VN3、VN组有6条具有显著性差异的代谢通路以嘌呤代谢,抗坏血酸和醛酸代谢,谷胱甘肽代谢,半乳糖代谢等通路为主。以上结果表明,不同的饲料对草鱼代谢物、差异代谢物富集的代谢通路有很大的影响。5.实用饲料搭配新鲜苦草对草鱼幼鱼生长性能、组织生化指标及肌肉营养成分的影响在第一章和第二章研究基础上,为了探究利用苦草的不同养殖模式对草鱼草鱼幼鱼生长性能,组织生化指标,肌肉营养成分以肌肉胶原蛋白基因的影响。以不含苦草粉的基础饲料(PA组)为对照,上午喂基础饲料下午喂新鲜苦草(PAB组)为实验组,选用初均重为23.47g的草鱼在室内水泥池网箱进行为期8周的养殖实验。结果显示,PAB组草鱼增重率和肝胰脏指数要低于对照组;肝胰脏中PAB的SOD、MDA、ALT都要高于PA组,CAT和AST要低于PA组;PAB组血清总蛋白含量高于PA组,其他指标都要低于PA组;PAB组肌肉的粗蛋白和粗脂肪含量都要低于对照组,PAB组的氨基酸总量、非必需氨基酸总量和鲜味氨基酸总量都要高于PA组,PAB在饱和脂肪酸总量、单不饱和脂肪酸总量、多不饱和脂肪酸总量n-3系不饱和脂肪酸总量和n-6系不饱和脂肪酸总量都低于PA组,而n-3/n-6高于PA组,胶原蛋白基因表达量差异不显著。以上结果表明,只投喂实用饲料时,草鱼生长迅速,但肌肉鲜味及营养价值偏低;实用饲料和新鲜苦草交替使用时,草鱼生长速度偏慢,但整体肌肉品质更好,鱼体抗病力可能更强。