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猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)是近年来新发现的动物病毒之_一，该病毒与猪的多种疾病综合征有关，特别是仔猪断奶后多系统衰竭综合征，该病最早于1991年在加拿大西部发现，其临床症状主要表现为进行性消瘦、呼吸道症状、发热、苍白及黄疸等，病原学及血清学调查表明，该病在许多国家都广泛存在，给全球养猪业造成了巨大的经济损失。为了研制安全、高效的疫苗用于PCV2感染的防制，本研究对PCV2 ORF2基因疫苗及PCV2-PRV二价基因工程疫苗进行了研究，主要研究内容如下： 1．PCV2 QRF2基因的克隆及其在ST细胞中的表达 采用PCR方法从包含PCV2 ORF2基因组的重组质粒pMD18-T-ORF2中扩增PCV2ORF2基因的完整编码区，将其克隆到pMD18-T Simple Vector载体后，构建了重组质粒pMD-702~*，经序列测定证实，该基因未发生任何碱基突变。用HindⅢ和KpnⅠ双酶切重组质粒pMD-702~*，将获得的PCV2 ORF2基因插入到哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1(+)中，构建出表达PCV2 ORF2基因的真核重组质粒pcDNA-ORF2，将重组质粒体外瞬时转染ST细胞后，经过RT-PCR方法证明重组质粒pcDNA-ORF2能够在哺乳动物细胞ST中转录，表达的蛋白大小与预期结果相符，且表达蛋白可与PCV2标准阳性血清反应，具有免疫学活性。 2．表达POV2 ORF2基因的重组伪狂犬病病毒的构建 将经PCR方法扩增的ORF2全基因插入到PRV通用转移载体pPI-2．EGFP的多克隆位点中，从而构建转移质粒pPI-2．EGFP．ORF2。然后再将该质粒与PRV SA215基因组共转染ST细胞，病变后经空斑纯化得到重组病毒SA215(C)。通过Southern blotting鉴定重组病毒，并通过RT-PCR或Western blotting检测重组病毒中外源基因的表达，结果表明重组病毒构建正确，且外源基因得到了正确表达。在此基础上，对重组病毒形态学、重组病毒的血清学特性、重组病毒的培养增殖特性等进行了研究，结果表明外源基因的插入不影响重组病毒在细胞上的增殖。 3．PCV2-PRV二价基因工程疫苗对小鼠和断奶仔猪的免疫原性试验 将重组病毒按疫苗生产程序制成疫苗，并研究二价基因工程疫苗对小鼠和断奶仔猪的免疫原性试验。小鼠试验结果表明对其免疫是安全的，这种疫苗免疫鼠能完全抵抗致死剂量PRV强毒的攻击，具有与亲本株疫苗相当的免疫保护效果。对断奶仔猪的免疫原性试验，对PRV的检测结果表明，SA215(C)能诱导产生PRV中和抗体；