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第一部分 胚鼠大脑皮质神经元的体外培养、鉴定及神经元缺氧模型的建立与评价 目的:建立胚鼠脑皮质神经元培养体系和建立神经元缺氧培养模型,并对神经元缺氧模型进行形态学评价。 方法: 1.改良目前被广泛使用的方法,采取联合使用0.05%胰酶及10IU/mlDNase Ⅰ获取神经元单细胞悬液,以加入2%B27,5%胎牛血清,1%Glutamax的Neurobasal Medium作为接种及维持培养基,接种48小时加入阿糖胞苷抑制胶质细胞生长,综合使用上述方法建立体外神经元培养体系; 2.使用Tubulin β Ⅲ单克隆抗体标记神经元,GFAP多克隆抗体标记星型胶质细胞,运用免疫荧光技术检测胚鼠脑皮质神经元纯度;3.使用国产厌氧培养箱充入85%N2、5%CO2、10%H2混合气建立胚鼠脑皮质神经元的缺氧模型;4.倒置相差显微镜下观察缺氧不同时点胚鼠脑皮质神经元,对神经元缺氧模型进行形态学评价。