“天然植物抗菌液”镇痛作用及机理研究

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疼痛是一类发病机理复杂且严重危害人类身心健康的疾病,现有的镇痛药物大多具有耐受、成瘾或损伤脏器等副作用;天然植物抗菌液(Natural plant antimicrobial solution, PAMs)作为来源于天然植物药的外用搽剂,具有无耐受、无成瘾且少不良反应等众多优势,前期应用实践表明其具有抗炎镇痛、消毒杀菌、抗肿瘤及促进创口愈合组织新生等多种功效,具有良好的开发前景和研究意义。由于PAMs是中药复方制剂,成分复杂不明,这对其各种药效发挥的机理研究有巨大影响,因此对其进行有效成分的定性定量分析对于后续研究开发及该制剂本身的安全性评价和质量控制十分重要。本文首先采用火焰原子吸收分光光度法(FAAS)测定PAMs中重金属和微量元素含量,结果显示PAMs中不含重金属元素镍(Ni)、铅(Pb)、铬(Cr)、镉(Cd),而含铜(Cu)0.0185μg·mL-1、铁(Fe)6.13μg·mL-1、锌(Zn)0.56μg·mL-1,少量的Cu和丰富的Fe、Zn对人体有益,且有助于该制剂药效的发挥。其次采用高效液相色谱法(HPLC)对PAMs中部分有效成分进行定性和定量分析,结果表明PAMs中含有尿囊素262.85μg/mLL、羟基红花黄色素A 94235μg/mL、龙血素A71.325μg/mL、乌头碱9.11μg/mL。本文利用小鼠甲醛致痛模型研究PAMs的镇痛作用,结果表明:给药时小鼠对于阳性对照药物的抵抗行为明显强于PAMs,说明PAMs对皮肤的刺激性弱于阳性药物;在小鼠后足皮下注射5%甲醛溶液后,0-5min及20-40min两个时相内,PAMs组的疼痛评分均明显低于阴性组(P<0.05)而高于阳性组(P>0.05),说明PAMs能一定程度上缓解急性疼痛和甲醛诱发的周围炎性疼痛;血清疼痛相关因子检测结果显示PAMs和阳性药物均能下调血清中的PGE2浓度(P<0.05)并上调β内啡肽含量(P<0.05)但阳性组的NO含量明显低于阴性组而PAMs组则与阴性组无明显差异,说明PAMs可通过抑制PGE2的合成和释放并上调p内啡肽含量以达到镇痛效果。利用Aβ25-35诱导PC 12建立神经细胞损伤模型以初步探究PAMs的神经细胞保护作用,显微观察和MTT检测结果表明1%、0.5%、0.25%的PAMs对PC12的正常生长无抑制作用;用Aβ25-35处理PC 1 2细胞,显微观察结果显示Aβ25-35会导致细胞聚团并死亡。MTT和LDH检测结果显示模型组细胞活力明显低于正常组(P<0.05)且LDH含量显著高于正常组(P<0.05),印证了显微观察结果并表明建模成功;0.5%、0.25%的PAMs组和1%猴头胶囊组细胞活力则显著高于模型组(P<0.05)且LDH含量低于模型组(P<0.05),说明0.5%、0.25%的PAMs和猴头胶囊一样能预防、缓解Aβ25-35所造成的氧化损伤;但1%PAMs组的LDH含量低于模型组,但其细胞活力明显低于模型组(P<0.01)外,说明1%的PAMs无法减轻A1325-35对细胞的氧化损伤。主要结论:PAMs中不含重金属元素镍(Ni)、铅(Pb)、铬(Cr)、镉(Cd),而含铜(Cu) 0.0185μg·mL-1、铁(Fe) 6.13μg·mL-1、锌(Zn) 0.56μg·mL-1;含丰富的尿囊素、羟基红花黄色素A、龙血素和微量的乌头碱;PAMs可通过下调PGE2的合成和释放并上调p内啡肽含量以达到抗炎镇痛效果,此外低浓度下还可预防和缓解A1325-35诱导的氧化损伤。
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