雌激素是母体妊娠识别信号,雌激素的合成受阻会影响胚胎的发育。HSD17B1基因是雌二醇生物合成的限速酶,催化雌激素转化为更具生物活性的雌二醇,HSD17B1在胎儿中异常增加会导致激素失衡影响胚胎发育。17β-羟基类固醇脱氢酶1型(HSD17B1)属于短链脱氢还原酶家族(short-chain dehydrogenases/reductases,SDR)HSD17B1是SDR家族中最常见的亚型之一。本研究对雌激素合成通路中HSD17B1基因的5’调控区进行表达调控分析,可以有效影响雌激素的表达水平,有助于了解母猪卵泡发育、成熟及排卵等生理过程的分子机制,使胚胎更好生存发育。研究结果对于寻找控制产仔数的主效基因,改良母猪的产仔数性状具有重要意义。本研究首先构建猪HSD17B1基因启动子缺失片段的双荧光素酶报告基因载体,将其瞬时转染猪卵巢颗粒细胞,分析猪HSD17B1基因的启动子活性并确定核心启动子区;通过单个个体测序比较二花脸和长白猪两个群体HSD17B1基因核心启动子的SNP,利用生物信息学软件预测潜在的特异转录因子p53和Fox A2,采用ChIP实验方法验证转录因子与猪HSD17B1基因的结合位点;构建转录因子的超表达载体和si-RNA,采用实时定量PC R检测转录因子和目的基因的mRN A水平,通过western blot检测目的基因的蛋白水平,通过双荧光活性分析检测转录因子与HSD17B1共转染的情况。研究结果在一定程度上揭示了猪HSD17B1基因的表达调控情况,研究结果如下:(1)克隆扩增获得了猪HSD17B1基因5’调控区2452 bp(-2414/+38),HSD17B1基因启动子缺失片段双荧光素酶活性分析确定在-2414/-2105区域存在正向调控元件,-731/-333区域可能存在负向的转录调控元件。HSD17B1核心启动子区可能为-731/-333区域。(2)比较44头二花脸和100头长白猪2个群体猪HSD17B1基因核心启动子区SNP,发现在二花脸HSD17B1基因-401位点处发现-GTTT插入突变,长白猪中未发现。而且在猪卵巢颗粒细胞中,发现有插入突变的启动子片段转录活性显著高于没有突变的启动子。(3)转录因子p53结合位点在猪HSD17B1基因启动子-383/-374区域,其结合的序列为GGGCATTCTC。在猪颗粒细胞中,超表达p53后HSD17B1基因启动子活性增强;而且超表达p53导致HSD17B1基因mRNA和蛋白水平表达增加。干扰p53表达后则HSD17B1基因启动子活性降低,HSD17B1基因mRNA和蛋白水平表达降低。转录因子Fox A2结合位点在猪HSD17B1基因启动子-412/-401区域,其结合的序列为ACTTATTGTCTT。在猪颗粒细胞中,超表达Fox A2后HSD17B1基因抑制启动子转录活性,HSD17B1基因mRNA和蛋白水平表达降低。干扰Fox A2表达后则HSD17B1基因启动子活性升高,HSD17B1基因mRNA和蛋白水平表达升高。