石油是目前世界经济发展的命脉,石油资源的开发和利用却面临着一系列严峻的问题。微生物采油就是解决这一问题的方案之一。现在,获取采油微生物的主要方法是从自然界筛选和直接利用油层微生物,而天然的石油微生物存在着耐热、耐酸、耐盐性不高的问题。为了解决这一问题,本研究运用基因工程技术,在大肠杆菌中构建了mb7多顺反子操纵子;然后以转座的方式成功地将mb7多顺反子操纵子整合入石油微生物基因组。以原始菌株hub5PN为对照,转座为阳性的石油微生物耐酸、耐高温。实验表明,mb7多顺反子操纵子的导入,可以明显提高石油微生物的耐酸性,也可以提高石油微生物对高温环境的耐受性。论文初步研究了石油微生物基因工程菌的构建方法,剖析了热休克蛋白对石油微生物抗逆性的影响。为了进一步构建具有高度耐酸性,高度耐碱性,高度耐盐的石油微生物,本研究用Sau3A酶对石油微生物的染色体进行不完全酶切,将其插入到无启动子的氯霉素抗性基因之前,构建基因文库。其方法是用氯霉素抗性平板,筛选启动子插入为阳性的石油微生物,并对氯霉素抗性为阳性菌种进行进一步鉴定。采用本方法成功地从石油微生物hub5PN中分离出启动子,hub5PN启动子提高了大肠杆菌对氯霉素的抗性。石油微生物启动子序列的成功分离,为进一步构建高效的石油微生物基因工程菌打下了切实可行的基础。