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目的：研究磷酸二酯酶抑制剂对Aβ诱导的海马神经元损伤后活力和增殖能力的影响，对Aβ诱导的大鼠行为学改变以及引起这些改变的可能作用机制。探讨PDE作为脑损伤救治药物筛选靶标的可能性。
方法：进行了动物试验和细胞试验两个方面的内容。1、动物实验：SD大鼠分为对照组、模型组、己酮可可碱组16.5mg/kg和咯利普兰组1mg/kg。模型组及给药组大鼠两侧海马内分别注射Aβ25-355μL，浓度为1mmol/L。给药组术后24h开始腹腔注射给药，每日1次，连续14d。模型组和对照组给与等体积的生理盐水。给药7d后做避暗实验，给药14d后做Morris水迷宫实验观察行为学变化。之后处死大鼠，用放射性免疫法测海马cAMP含量。2、细胞实验：大鼠海马神经元原代培养，2日龄SD大鼠，在严格无菌操作下取海马进行原代培养。持续培养一周后，给予药物干预。模型组：Ag25-3525μmol/L，给药组：己酮可可碱三个浓度组0.1mg/ml、0.05mg/ml和0.025mg/ml。药物作用24小时后，利用MTT比色试验和检测细胞液中LDH水平，观察神经元的生长活性。定向高分化PC12细胞培养，用于检测经过药物处理后细胞内cAMP含量的变化。模型组和给药组的处理方法同原代培养。裂解细胞后用放射性免疫法检测cAMP的水平。
结果：1、动物试验：在避暗试验中，假手术组的潜伏期为191.77±86.77s，模型组潜伏期77.24±67.49s，相比较与假手术组显著缩短(P<0.05)，表明脑室注射Aβ25-35制备的脑损伤模型成功，大鼠的长期记忆能力明显降低。己酮可可碱组潜伏期为153.10±74.23s和Rolipram组大鼠的潜伏期160.12±84.77s，比较模型组的潜伏期显著延长(P<0.05)。说明磷酸二酯酶抑制剂可以改善Aβ25-35诱导的脑损伤后长期记忆能力。在Morris水迷宫试验中，假手术组潜伏期6.38±4.53s，模型组寻找平台潜伏期为14.74±9.61s，与假手术组比较显著延长(P<0.05)，表明造模成功。与模型组比较，己酮可可碱组潜伏期6.78±4.51s和Rolipram组大鼠潜伏期8.90±4.51s，较模型组都显著缩短(P<0.05)。表明己酮可可碱和咯利普兰可以反转Aβ25-35引起的参照记忆能力的缺损。放射性免疫实验结果显示，己酮可可碱组的cAMP水平为5.417±3.626pmol/L/mg、Rolipram组大鼠海马的cAMP水平为4.231±5.713pmol/L/mg，均要明显高于模型组的水平0.266±0.182pmol/L/mg(P<0.05)。2、细胞试验：大鼠海马神经元原代培养的MTT比色试验中，与模型组吸光度值0.624比较，己酮可可碱不同剂量组OD值(0.939、0.893、0.769)均显著增高(P<0.05)。表明己酮可可碱可以促进细胞的增殖。细胞液中的LDH水平模型组为1491.837U/L，己酮可可碱各组分别为825.000U/L、867.347U/L、1165.306U/L，相比较与模型组均显著减少(P<0.05)。说明己酮可可碱能够抑制Aβ25-35的细胞毒性作用，减少神经元的凋亡。放射性免疫法检测PC12细胞内cAMP水平，己酮可可碱处理组分别为4.393pmol/L、3.487pmol/L和3.346pmol/L，均显著高于模型组cAMP水平1.959pmol/L(P<0.05)。
结论：本试验成功制备了Aβ诱导脑损伤和细胞损伤模型。动物行为学实验结果表明磷酸二酯酶抑制剂可以显著改善Aβ诱导脑损伤后学习记忆能力。放射性免疫试验结果提示这一作用可能机制是与抑制PDE活性，减少细胞内cAMP水解，提高海马区cAMP水平，进而通过cAMP—PKA—CREB通路和cAMP—MEK/ERK通路改善学习记忆功能有关。细胞试验结果表明磷酸二酯酶抑制剂可以减轻Aβ诱导的神经元损伤，增强细胞活力，减少损伤。