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CYP2B6是细胞色素P450家族中CYP2B亚家族的主要成员，其含量约占肝脏CYP总量的0.2％～6％，参与临床约7％药物的代谢。CYP2B6对药物的代谢具有较大的个体差异。目前认为CYP2B6的基因多态性可能是引起个体差异的主要原因，但相关研究多数在人体体内和重组酶体系展开，前者不能单一反映代谢过程，后者与人体内环境相差较远，而人肝是与人体最为接近的体外代谢平台。 本研究拟以肝功能正常的人肝标本为研究对象，考察基因多态性对CYP2B6代谢活性的影响，以期为临床合理应用CYP2B6底物提供理论依据。 1、材料与方法 1.1人肝酶动力学参数的测定 采用差速离心法制备人肝微粒体，Bradford法测定肝微粒体蛋白含量。选用安非他酮作为CYP2B6的探针药物，并以探针药物的生物转化程度(TR)作为反应速度。 收集肝功能正常的肝标本105例，年龄20～75岁，男性和女性分别为35例和70例，有吸烟史和饮酒史的分别为11例和10例，用药史显示近期均未用明显影响CYP酶活性的药物。探针药物安非他酮的浓度范围为78.125～5000μM，孵育体系中蛋白浓度均为0.5mg·ml-1，孵育时间均为60min，测定105例人肝的酶动力学参数Km、Vmax和CLint。. 1.2安非他酮代谢物羟基安非他酮浓度的测定 采用HPLC-UV测定孵育体系中安非他酮羟基安非他酮的浓度。色谱柱为DiamondC18柱，流动相为乙腈:50mM磷酸二氢钾(pH3)=21∶79，流速1ml·min-1，检测μ长214nm。于反应体系中加入10μl高氯酸，涡旋离心，上清80μl进样。所建立的测定方法在0.121～3.870μM范围内呈现良好的线性关系(r＞0.999)，日内、日间变异均＜15％，相对回收率均在85％～115％之间，说明所建立的分析方法符合生物样本的测定要求。 1.3CYP2B6的基因分型 采用DNA提取试剂盒提取肝组织中的DNA。PCR产物直接测序法对多态性位点CYP2B6*4(785A＞G)、CYP2B6*6(516G＞T、785A＞G)及CYP2E1*9(516G＞T)进行基因分型。 1.4统计方法 采用GraphPadPrism5.0软件计算酶动力学参数，SPSS17.0软件对各项数据资料进行统计学分析。不同基因型酶动力学参数的比较采用非参数检验，检验水准α为0.05。 2、结果 2.1人肝CYP2B6酶动力学参数 以安非他酮为底物，人肝中CYP2B6的酶动力学参数Km、Vmx及CLint（中位数，范围）分别为(73.4，17.1～393.3)μM、(54.8，12.8～333.5)pmol·min-1·mg-1protein及(0.77，0.13～5.22)μl·min-1·mg-1protein，个体差异可达23～40倍。 2.2性别、年龄、吸烟及饮酒对人肝CYP2B6酶动力学参数的影响 统计分析结果显示，受试者的性别、年龄、吸烟及饮酒对肝脏CYP2B6酶动力学参数均无明显影响。 2.3基因多态性对人肝CYP2B6酶动力学参数的影响 根据基因分型的综合结果，105例病例可分为7种基因型，即CYP2B6*1/*1、*1/*4、*1/*6、*4/*6、*1/*9、*4/*4和*6/*6，其中基因型CYP2B6*1/*9、*4/*4和*6/*6携带者各1例。统计结果显示，和野生型相比，CYP2B6*1/*6的携带者Km明显增大，Vmax明显降低，CLint明显降低(P＜0.05)。而基因型*1/*9者Vmax和CLint有明显较大（均为*1/*1携带者中位数的5.9倍）;基因型*4/*4者Km明显较大（为*1/*1携带者中位数的6.0倍），Vmax和CLint明显较小，但均因病例数较少，无法进行统计学分析。 结论： 1.性别、年龄、吸烟及饮酒对人肝CYP2B6代谢活性无明显影响。 2.CYP2B6*1/*6携带者人肝微粒体CYP2B6代谢活性明显降低。 3.CYP2B6相同基因型的代谢活性存在明显个体差异。