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目的：获得正常Parasin Ⅰ DNA序列，依据相关的文献报道及生物信息学方法，寻找合适的突变位点，并将天然型(Parasin Ⅰ)与突变型(m Parasin Ⅰ)分别在大肠杆菌中融合表达，初步测定天然型肽及突变后肽的抗菌活性，为进一步研究Parasin Ⅰ结构与功能的关系奠定基础。
方法：
1．根据Parasin Ⅰ的氨基酸序列及大肠杆菌偏爱密码子，推出Parasin Ⅰ编码基因的序列，并在Parasin Ⅰ基因的两侧分别加上了EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ的限制酶切位点，设计出目的基因。通过化学合成方法，获得含EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ识别序列的Parasin Ⅰ基因。
2．将Parasin Ⅰ基因与克隆载体pUC-57连接、转化大肠杆菌DH5 α，经蓝白筛选，挑取阳性菌落，抽提重组质粒鉴定后测序。测序正确后将阳性重组质粒和融合表达载体pGEX-4T-1经EcoRI和SalI双酶切，16℃连接、转化大肠杆菌BL21，挑取菌落，抽提重组质粒鉴定并测序。
3．依据相关的文献报道，寻找合适的突变位点，利用RCR定点突变技术将Parasin Ⅰ DNA序列中第18位丝氨酸密码子AGT突变为甘氨酸密码子GGC、第19位丝氨酸密码子AGC突变为赖氨酸密码子AAA。
4．将鉴定为阳性的两种重组菌落用IPTG 37℃诱导表达2～5小时，全菌体蛋白SDS-PAGE电泳观察表达结果。将表达的含融合蛋白的大肠杆菌BL21经B-PER GST Spin纯化试剂盒纯化，用凝血酶切割融合蛋白，Glutathione- Sepharase4B亲和层析柱纯化。最后用抑菌圈实验初步鉴定天然肽及突变肽的抗菌活性。
结果：
1．化学合成的Parasin Ⅰ DNA片段与克隆载体PUC-57连接并测序，结果表明与预先设计的Parasin Ⅰ DNA序列一致。
2．Parasin Ⅰ基因及与融合表达载体连接、转化大肠杆菌BL21，抽提重组质粒鉴定，测序结果表明Parasin Ⅰ基因及与融合表达载体连接方向正确，可以进行诱导表达。
3．依据Parasin Ⅰ结构及相关文献资料设计突变位点,PCR定点突变技术突变后测序结果表明Parasin Ⅰ DNA序列中第18位丝氨酸密码子AGT突变为甘氨酸密码子GGC、第19位丝氨酸密码子AGC突变为赖氨酸密码子AAA，达到预期突变结果。
4．经IPTG诱导表达2-5小时后，SDS-PAGE电泳结果可见28KD的融合蛋白条带。表达的融合蛋白经B-PER GST Spin纯化试剂盒纯化回收，得到可溶形式的融合蛋白。
5．用凝血酶对融合蛋白切割分离GST-Parasin Ⅰ蛋白、GST-m Parasin Ⅰ纯化后对Parasin Ⅰ及m Parasin多肽的抗菌活性用抑菌圈实验鉴定，二者对金黄色葡萄球菌ATCC25938有一定的抑菌作用。
结论：成功构建了Parasin Ⅰ成熟肽及突变体，并在大肠杆菌中诱导表达成功，经纯化后，初步获得了具有抑菌活性的Parasin及mParasin多肽。为下一步蛋白抗菌活性的定量测定及真核表达奠定了基础。